细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

产品货号：R23340

产品规格：100T

产品简介：

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是一种进化上保守的降解过程，可靶向长寿命蛋白、细胞器及其他细胞质组分并通过溶酶体途径进行降解。自噬通路的激活对多种细胞功能都是必需的，包括饥饿状态下的存活、细胞内组分清除、发育及免疫等过程。

单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm。尚宝细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)适用于培养细胞的自噬染色，又称为MDC染色液，可与EB合用双染。

产品组成：

自备材料：

1. 低速离心机

2. 1.5ml离心管

3. 载玻片、盖玻片

4. 荧光显微镜

操作步骤（仅供参考）：

(一)玻片法

1. 收集细胞，用300～500μ l的Wash buffer清洗细胞1次，800～1000g离心5min，弃上清。

2. 加入适量的Stain buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10 ⁶ /ml。

3. 取5μ l MDC Stain(500×)加至245μ l Stain buffer，混匀，即为MDC Stain(10×)。

4. 取90μ l细胞悬液至新的1.5ml离心管中,加入10μ l的MDC Stain(10×)，轻轻混匀。

5. 37℃或室温避光染色15～45min。

6. 800～1000g离心5min，弃上清，收集细胞，用300～500μ l的Wash buffer清洗细胞2次，800～1000g离心5min，弃上清。

7. 加入100μ l的Wash buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。

8. 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。

(二)96孔板法

1. 配制MDC染色工作液：按MDC Stain(500×)：Stain buffer=1：499的比例混合，即为MDC染色工作液。如不能及时用完，应-20℃避光保存。

2. 轻轻吸除96孔板中的培养液，加入100μ l MDC染色工作液至各孔，37℃ 5%CO₂避光孵育15～60min。

3. 各孔加入100μ l Wash buffer清洗2～3次。

4. 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。

(三)MDC与EB双染法

1. 收集细胞，用300～500μ l的Wash buffer清洗细胞1次，800～1000g离心5min，弃上清。

2. 加入适量的Stain buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至 10 ⁶ /ml。

3. 取5μ l MDC Stain(500×)加至245μ l Stain buffer，混匀，即为MDC Stain(10×)。

4. 取90μ l细胞悬液至新的1.5ml离心管中，加入10μ l的MDC Stain(10×)和0.2uM EB染色液，轻轻混匀。

5. 滴加于在玻片上，室温避光染色15～30min，加盖玻片。

6. 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm)，计数并拍照。

染色结果：

正常细胞       细胞被均匀染成黄绿色荧光

凋亡细胞       染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一，致密浓染的绿色颗粒。

注意事项：

1. MDC Stain和EB对人体有一定害处，请小心操作。

2. AO常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

3. 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。

有效期：12个月有效。