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细胞炎症因子检测试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被细胞炎症因子试剂盒捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的细胞炎症因子呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
细胞炎症因子检测试剂盒通常基于酶联免疫吸附实验(ELISA)原理。该试剂盒包括特异性抗体和标记物,用于检测样本中的炎症因子水平。在ELISA中,样本被加入到涂有特异性抗体的微孔板中,并与这些抗体结合。随后,标记物被加入到微孔板中,并与未结合的特异性抗体结合。通过加入底物产生化学反应,可以测量标记物的信号强度,从而确定样品中炎症因子的浓度。
一、试剂盒组成:
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片 | 2片 | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 5ml×1瓶 | 10ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20×浓缩洗涤液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
二、样本处理要求:
1. 样本应从患者采集后立即处理,以避免因延迟处理而导致结果失真。
2. 样本可以是血液、血清、血浆或组织等生物体内的液体或组织。
3. 样本应在低温条件下保存,以避免因长时间储存而导致样本降解。
4. 样本应避免多次冻融循环,以避免因多次冻融而导致样本降解。
5. 样本应根据试剂盒说明书的指导进行前处理和稀释。
6. 操作人员应穿戴手套、口罩等个人防护装备,并按照操作规范进行样本处理。
总之,样本处理需要保证样本的质量和纯度,以确保能够得到可靠的检测结果。
三、操作步骤:
1. 样品处理:将待测样品如血清、血浆或培养上清等加入试剂盒提供的孔板中。
2. 孔板处理:根据试剂盒说明书中所示方法,对孔板进行洗涤和添加辅助试剂等处理,以保证测定的准确性和精度。
3. 加入检测试剂:在处理完孔板后,向每个孔加入特定的检测试剂,如酶联免疫吸附试剂盒(ELISA)中的抗体或底物等。
4. 孵育:将孔板置于适宜的温度下(一般为37℃),静置一定时间,使检测试剂与待测样品中的分子发生特异性作用。
5. 洗涤:将孔板中未与检测试剂结合的杂质物洗去,以避免误差的出现。
6. 信号检测:对加入检测试剂的孔,进行信号检测,常见的包括荧光法、吸收法、放射免疫分析法等。
7. 数据分析:根据检测仪器所测得的信号值,参照试剂盒说明书中的标准曲线,计算出待测样品中特定分子的含量,并进行数据分析。
需要注意的是,具体的操作步骤可能会因为不同的试剂盒而有所差异,因此在使用前,一定要仔细阅读试剂盒说明书,并按照说明书中的方法进行操作。
四、注意事项:
1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间建议控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4、请每次测定的同时做标准曲线,建议做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6、底物请避光保存。
7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9、本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。