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猪口蹄疫抗体检测试剂盒一般采用酶联免疫吸附试验(ELISA)原理。具体步骤是将待检血清样品加入已包被有猪口蹄疫病毒抗原的微孔板孔中,若样品中含有与该抗原结合的抗体,则抗体与抗原结合形成复合物。随后加入特异性抗猪IgG抗体标记的酶,如辣根过氧化物酶(HRP)等,并在适宜条件下使其与复合物反应形成固定的复合物。最后加入底物使酶催化反应产生颜色,在酶反应终止后检测颜色强度,判断样品中是否含有猪口蹄疫抗体。
猪口蹄疫抗体ELISA试剂盒组成:
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片 | 2片 | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品 | 0.3ml×6管 | 0.3ml×6管 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 5ml×1瓶 | 10ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
20×浓缩洗涤液 | 15ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
猪口蹄疫抗体检测试剂盒的操作步骤一般如下:
1. 取出试剂盒并等所有试剂达到室温(一般为20-25°C),准备好样本。
2. 将标准品、样品和控制品分别稀释,加入已经涂有猪口蹄疫抗原的微孔板中。
3. 在37°C下孵育30分钟。
4. 把孵育后的孔板清洗干净,并加入稀释好的辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体。
5. 再次在37°C下孵育30分钟。
6. 再次清洗孔板,并添加显色底物。
7. 孔板在避光条件下孵育15分钟。
8. 加入终止液终止反应。
9. 使用酶标仪进行测定。
注意事项:操作前应认真阅读试剂盒说明书,并严格按照说明书要求进行操作。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。
检测范围:
灵敏度:
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:2-8℃。
2.有效期:6个月。