ViralStars LC Lentivirus Concentration Solution(5x)

CatalogNumber：LC110R

01/产品概述

　　基于人类免疫缺陷病毒-1（HIV-1）的慢病毒载体是一种用于基因转移研究的载体。慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面，慢病毒载体可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使用慢病毒载体能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。在体外实验及体内实验的研究中，慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一，并且正在获得越来越广泛的应用。

　　LeapWal ViralStars 慢病毒浓缩试剂（5x）是针对慢病毒富集而优化的聚合物材料，它提供了一种简单、快速、高效的慢病毒颗粒浓缩方法。只需将慢病毒上清液与慢病毒浓缩试剂按比例混合，短时间孵育，采用标准离心机进行离心即可得到慢病毒颗粒沉淀。超滤、超速离心法等病毒浓缩法，操作时间长，步骤繁琐，且通常会有细胞碎片和血清蛋白等的污染，病毒纯度低。使用本产品进行病毒浓缩后，病毒滴度可提高10-100倍，病毒回收率最高可达约90%，病毒损失少，并且病毒在浓缩过程中能保持病毒生物活性。整个实验过程可在4小时内快速完成，无需超速离心即可获得出色的回收效率。

02/产品组分

03/保存条件

冰袋（wetice）运输。4℃保存，有效期12个月。

04/产品特点

　　简单快速——操作简单，无需超速离心，确保活性，实验耗时不超过4小时

　　浓缩效果优——病毒滴度可浓缩10-100倍以上（TransductionUnits/mL）

　　回收效率高——慢病毒回收效率高达90%以上

　　应用范围广——适用于所有类型的慢病毒颗粒

05/实验流程概要

06/实验步骤

　　1.将含有慢病毒颗粒的培养基转移至无菌容器中，300xg离心10分钟以除去细胞碎片。

　　Ø为保证病毒活性，浓缩前的病毒上清液应尽量选择新鲜收集的病毒原液。

　　2.使用0.22μm过滤器过滤上清液至无菌容器中。

　　Ø如果使用滤膜过滤，推荐使用低蛋白结合力的纤维素醋酸酯或聚醚砜（PES）膜，不推荐使用硝酸纤维素膜（NC）。

　　3.向每4体积含慢病毒的上清液中加入1体积慢病毒浓缩试剂（5x），使慢病毒浓缩试剂（5x）稀释为工作浓度（1x）。

　　4.将上述混合物于4℃摇床中慢速孵育3小时或过夜。

　　Ø慢病毒颗粒在4℃可稳定长达4天。

　　5.将混合物4℃4000xg离心25分钟。离心后，慢病毒颗粒可能在容器底部显示为米色或白色沉淀。

　　6.小心弃去上清液，4℃4000xg离心5分钟，再次弃尽残余液体，应尽量避免吸走沉淀物，该沉淀物即为慢病毒颗粒。

　　7.用初始体积（原上清液体积）1/10-1/100预冷的慢病毒保存液重悬病毒颗粒，使用移液器小心吹打，重悬慢病毒颗粒。

　　Ø重悬病毒沉淀时，吹打操作要轻柔，可选择慢病毒保存液（LS110R）、*培养基或FBS重悬慢病毒。

　　8.小体积分装慢病毒，储存于-80℃冰箱或液氮中，留取少量病毒测定滴度。

　　Ø应尽量避免慢病毒反复冻融，否则会降低病毒滴度。

07/适用范围

　　LeapWal ViralStars 慢病毒浓缩试剂（5x）适用于任何慢病毒颗粒的浓缩方法。

08/注意事项

　　1.为了您的健康安全，请规范操作，穿戴实验服与手套开展实验；

　　2.所有慢病毒操作均需在生物安全柜（BSL2级）中进行；

　　3.本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及治疗。

09/实验案例分析

　　1.使用10cm细胞培养皿培养ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line（CL110001），待细胞密度为60-70%左右开始包装慢病毒；

　　2.使用ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit（LP110-10）进行慢病毒包装（阳性对照质粒含GFP绿色荧光蛋白基因），具体包装步骤按照说明书进行；

　　3.准备目的细胞：将需感染的目的细胞293T以(1-3)x10^4的密度接种于96孔板内，次日即可进行慢病毒感染；

　　4.待病毒包装48h后，收集慢病毒上清液约9mL，300xg离心10分钟以除去细胞碎片，使用0.22μm过滤器过滤上清液至无菌容器中。

　　5.取1mL病毒上清液作为浓缩前对照1*，剩余8mL病毒上清液中加入2mL本产品进行慢病毒浓缩，具体慢病毒浓缩步骤按照说明书进行，保留1mL浓缩后应弃去的上清液作为对照2#，使用800μL *培养基轻轻重悬慢病毒颗粒，即可得到浓缩10倍的慢病毒；

　　6.慢病毒感染目的细胞：将96孔板细胞弃去上清，每孔加入新鲜培养基100μL，Polybrene（LE110-01）0.2μL，浓缩后慢病毒100μL或对照1*（浓缩前慢病毒原液）100μL或对照2#（浓缩后应弃去的慢病毒上清液）100μL；

　　7.继续培养细胞48h后，使用荧光显微镜观察绿色荧光强度，实验结果如图2所示。

图2: 慢病毒感染目的细胞293T观察GFP表达情况。（左）浓缩10x慢病毒，（中）对照1*（浓缩前慢病毒原液），（右）对照2#（浓缩后应弃去的慢病毒上清液）。

10/其他相关产品