Cell Freezing Medium Plus (1x)

Especially suitable for lymphocyte and stem cell cryopreservation

Catalog Number：PZ210R

01/产品概述

细胞药物作为继化学药、生物药之后出现的新型药物在临床上的应用越来越广泛。尤其，干细胞治疗和免疫细胞治疗在退行性、损伤性、遗传缺陷性疾病以及肿瘤的治疗中具有巨大的优势和广阔的发展前景，而高效安全的细胞制剂是细胞治疗中的关键因素。在细胞培养中，细胞冻存是最关键环节之一，尤其在细胞治疗、细胞存储中对细胞冻存更有特殊要求。

传统的程序降温法使用的冻存液主要配方为培养基、血清、DMSO。血清大多采用胎牛血清，含有动物源性物质，成分复杂，血清中未知成分和病毒等感染物质会给冻存带来影响与风险。该方法在科研上广泛使用，但是显然已经不能适应现今细胞治疗的应用场景。

针对干细胞和免疫细胞的冻存，LeapWal Biotech推出一款Cell Freezing Medium Plus (1x)，是一种化学成分明确、无动物源成分、使用医药级原料的即用型细胞冻存液，尤其适合淋巴细胞和干细胞的冻存。这款产品操作简单，无需程序降温，无动物源性蛋白，不含血清，病毒、病菌和支原体等污染可能性低，不仅能有效、安全地保护细胞，同时，使用药用级原料，所有成分均明确，极大降低批次间差异。适用于干细胞、免疫细胞以及大多数细胞系冻存。

02/产品组分

03/保存条件

冰袋（wet ice）运输。4℃保存，有效期12个月。若长期不用，可-30℃至-10℃保存，有效期24个月。

04/产品特点

即用型细胞冻存液，无需程序降温，可直接冻存于-80℃冰箱，长期保存（>5年）

安全性高，无动物源性蛋白，不含血清，病毒、病菌和支原体等污染可能性低

复苏后的细胞存活率优异，复苏率高达90% 以上，细胞活力好

使用药用级原料，所有成分均明确，极大降低批次间差异

05/实验流程概要

06/实验步骤

一：细胞冻存步骤

1. 选择处于指数生长期的细胞，按照常规方法收集贴壁细胞或悬浮细胞于离心管中。

2. 1000 rpm-2000 rpm，离心5分钟，收集培养细胞沉淀，弃上清液。

3. 加入适量4℃预冷的LeapWal Cell Freezing Medium Plus(1x) 重悬细胞，制成细胞悬液。

Ø 按照细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存液的量，推荐冻存密度：1x10^6 至5x10^6cells/mL。

4. 将细胞悬液分装至已标记的冻存管中，建议每管1mL或1.5mL。

5. 直接将细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中，可长期冷冻保存。如果想放入液氮中长期保存，需先放入-80℃冰箱至少12小时，方可移至液氮罐中长期保存。

二：冻存细胞复苏步骤

1. 在15 mL离心管中加入5-10 mL平衡至室温的*培养基。

2. 从-80℃冰箱/液氮中取出冻存的细胞，立即放入37℃水浴锅或其他细胞复苏设备中，迅速解冻。

3. 将冻存管中的细胞悬液逐滴转移至预先准备好的含*培养基的离心管中，1000 rpm-1500 rpm，离心5分钟，收集细胞沉淀，弃上清（操作时小心，切勿将细胞沉淀移去）。

4. 加入适量平衡至室温的*培养基重悬细胞，接种到事先准备好的培养容器中，轻轻摇晃培养容器，使细胞分布均匀。

5. 镜检细胞后，可根据各自研究的需要和方法进行细胞常规培养。培养5-24h后，观察细胞状态，可视情况更换新鲜细胞培养液。

07/适用范围

LeapWal Cell Freezing Medium Plus(1x) 适用于干细胞、免疫细胞以及大多数细胞系冻存。该款冻存液使用药用级原料，化学成分明确，适合细胞储存、细胞治疗以及科学研究等不同场景使用。

08/质量控制

LeapWal Cell Freezing Medium Plus(1x) 通过严格的内毒素、渗透压、pH测试和无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）。

09/注意事项

1. 若长期不用，本产品可-30℃至-10℃保存，再次使用时，请在2-8℃融化LeapWalTM  Cell Freezing Medium Plus(1x)，避免反复冻融。

2. 使用LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 冻存细胞后，应尽量减少冻存细胞在外存放时间，尽快移入-80℃超低温冰箱长期保存。

3. LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 尤其适合淋巴细胞或干细胞冻存，建议使用本产品冻存细胞时，先对其进行试验性冻存、复苏、培养的预实验，确认性能后再进行正式冻存。

4. 该产品在室温条件下放置的时间不宜过长，以免影响冻存效率。

5. 免责声明: 本公司将不为任何不正当使用此产品所发生的意外负责。

6. 为了您的健康安全，请规范操作，穿戴实验服与手套开展实验。

7. 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及治疗。

10/实验案例分析

一、冻存细胞复苏存活率检测

1. 选择处于对数生长期的淋巴细胞，按照常规方法收集细胞于离心管中。

2. 1000 rpm，离心5分钟，收集培养细胞沉淀，弃上清液。

3. 加入适量4℃预冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 、K公司冻存液、B公司冻存液分别重悬细胞，制成细胞悬液。冻存密度为1x106 cells/mL。

4. 将细胞悬液分装至已标记的冻存管中，每管1mL，放入-80℃冰箱中，冷冻保存。

5. 冻存12个月后，进行细胞复苏，对复苏后的细胞进行台盼蓝染色，统计细胞存活率。

二、冻存细胞复苏生长曲线检测

1. 选择处于对数生长期的淋巴细胞，按照常规方法收集细胞于离心管中。

2. 1000 rpm，离心5分钟，收集培养细胞沉淀，弃上清液。

3. 加入适量4℃预冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 、K公司冻存液、B公司冻存液分别重悬细胞，制成细胞悬液。冻存密度为2x105 cells/mL。

4. 将细胞悬液分装至已标记的冻存管中，每管1mL，放入-80℃冰箱中，冷冻保存。

5. 冻存1个月后进行细胞复苏，对复苏后的细胞进行台盼蓝染色，绘制生长曲线。

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