对培养基中pH值测量进行测量做好品控

pH 值会影响培养基的外观及其培养微生物的能力。大多数细菌在 pH 6.5 - 7.0 下生长，而动物细胞在 pH 7.2 - 7.4 下茁壮成长。使用 6261-10C 平板玻璃 pH 电极或 0040-10D ISFET pH 电极和 pH 计测量最终形式的培养基样品在室温下的 pH 值，以确保每批样品的质量。

介绍
在实验室中，细菌、酵母、真菌、动物细胞和植物细胞等微生物在适宜的生长环境中培养，这些环境被称为培养基或生长培养基，用于各种微生物测试。培养基含有营养物质、生长促进因子、能量源、缓冲盐、矿物质、金属，有时还含有凝固剂或胶凝剂（琼脂），以支持微生物的生长和存活。它们可以通过混合各个成分在内部制备，也可以作为脱水培养基在市场上购买，并且可能以液体（肉汤）、半固体或固体（琼脂平板、斜面或深管）的形式存在，具体取决于凝固剂或胶凝剂的含量。不同类型的培养基适用于不同类型的微生物和应用。
除了完整的营养成分外，正确且稳定的 pH 值是培养基中微生物最佳生长的另一个重要要求。培养基的 pH 值应适合要生长的微生物。大多数细菌在 pH 6.5 - 7.0 下生长，而大多数动物细胞在 pH 7.2 - 7.4 下茁壮成长。由于某些微生物（如细菌）往往会释放会干扰其生长的酸性产物，因此在培养基中添加了缓冲液以稳定 pH 值。培养基制造商会调整脱水培养基的 pH 值，以便冷却至 25°C 时成品培养基的最终 pH 值符合产品标签上的规格。
在使用之前，每一批培养基都必须经过质量控制测试。最重要的化学测试是 pH 测量，因为 pH 会影响培养基的性能。如果成品培养基的 pH 值超出建议范围，不仅培养基中预期生长的微生物的生长会受到抑制，还可能发生物理变化，例如成分沉淀或琼脂软凝胶化。在用 pH 缓冲液进行适当校准后，可以使用 pH 计和 pH 电极简单地对液体、半固体或固体培养基进行常规 pH 检查。
扁平 pH 电极，也称为平底 pH 电极、平尖 pH 电极和平面 pH 电极，通常用于测量培养基的 pH 值，尤其是琼脂平板。扁平 pH 电极的传感膜和参比结均构造在电极主体的平面尖头上。这种尖头配置非常适合测量单滴或少量液体样品的 pH 值，以及软固体或半固体样品（如肉、纸、皮、布、奶酪、树叶、皮革、面包面团和培养基）的湿润表面。
HORIBA 提供两种基于不同电极技术的平板 pH 电极，即 6261-10C 组合平板玻璃 pH 电极和 0040-10D 离子敏感场效应晶体管 (ISFET) pH 电极。前者的 pH 敏感部分是基于 pH 玻璃电极技术的玻璃膜，而后者的 pH 敏感部分是使用 pH 晶体管技术的微型半导体传感器。6261-10C 是一种可再填充组合 pH 电极，其玻璃体可抵抗化学侵蚀，套管接合部可防止堵塞，因为与传统陶瓷接合部相比，其流速相对较高。0040-10D 采用 ISFET 芯片和非玻璃体设计，坚固耐用、不易破碎、维护成本低且防水。0040-10D 相对于 6261-10C 的优势如下：
0040-10D ISFET pH电极的特点：
1.传感器可更换，用软牙刷即可轻松清洁，并可干燥存放。
2.坚固的环氧树脂机身非常适合不可接受玻璃材料的应用和环境。
3.它集成温度传感器，可实现自动温度补偿（ATC）和精确的 pH 读数。
4.具有改进的静电保护电路，减少静电影响。
5.它能够快速响应并减少 pH 条件下的酸性或碱性误差。
6.不使用时会自动关闭。

方法
仪表设置和校准
由于 pH 值与温度有关，因此请使用具有 ATC 功能的 pH 计。如果使用 6261-10C pH 电极，请使用经过校准的温度计测量 pH 缓冲液的温度，并将该值输入 pH 计。这将允许 pH 计在校准中补偿温度效应。
1.根据使用说明书准备 pH 电极。
2.在pH计中设置pH缓冲液组（例如USA或NIST）和分辨率（例如0.01pH）并连接pH电极。
3.选择至少两种 pH 缓冲液（通常使用 pH 4.01、7.00 和 10.01 USA 缓冲液），以涵盖培养基的预期 pH 值。将少量新鲜的 pH 缓冲液倒入烧杯中进行校准。
4.用蒸馏水或去离子水冲洗 pH 电极尖头并用软纸巾擦干。
5.根据制造商的说明，使用 pH 缓冲液校准 pH 电极/仪表系统。
校准后，每个斜率应在 95 – 105% 之间。如果斜率不在此范围内，请更换 pH 缓冲液并进行清洁、排空/重新填充（仅适用于 6261-10C），然后根据说明手册调节 pH 电极。
样品制备和测量
除非培养基制造商另有规定，否则应在室温（20 – 25°C）下测量培养基的 pH 值。为了获得准确的结果，pH 缓冲液和样品应处于相同的温度。
实验室制备的培养基应在分配进行灭菌之前检查 pH 值，并用 1M NaOH 或 1M HCl（如有必要）进行调整。灭菌后应验证 pH 值，因为 pH 值可能会发生变化。相比之下，如果制备得当，市售的脱水培养基通常不需要 pH 值调整，因此可以检查单个灭菌成品培养基样品的 pH 值。对于琼脂培养基，取凝固样品的 pH 值。
1.将扁平 pH 电极的尖头放在培养基样品表面测量 pH 值。确保尖头接触培养基且两者之间没有间隙。
2.稳定后记录仪表上显示的 pH 值和温度。
3.请参阅文献以了解培养基所需的 pH 范围。对于市售的脱水培养基，请参阅产品标签以检查 pH 是否在规定范围内。如果不在，请遵循培养基制造商的建议。  
4.在测量另一个样品之前，用蒸馏水或去离子水冲洗 pH 电极尖头，并用软纸巾擦干。
5.测试后丢弃样品。
务必将 pH 电极保持清洁。要清除 pH 电极上的蛋白质残留物，请使用 HORIBA 250 清洁溶液和温水。有关清洁和维护的更多信息，请参阅电极使用说明书。