本视频为厦门逸漠生物出品关于贴壁细胞传代培养步骤操作指南，我们对每一步操作都做了演示，以便实验者更好地理解贴壁细胞传代实验过程。

贴壁细胞传代实验准备

提前开启紫外照射30min消毒灭菌，工作台开灯通风10min，用75%酒精擦拭台面

贴壁细胞传代所需试剂物品

细胞培养液，胰酶，PBS，培养皿等

贴壁细胞传代步骤

从培养箱拿出细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到80%以上时，即可进行传代

第一步：将细胞培养皿放入超净工作台中，吸去上清，沿血壁加入5ml PBS

第二步：轻洗细胞表面，洗去表面培养基，再将PBS弃去

第三步：加入2ml胰酶，37℃消化1-2分钟，显微镜下观察细胞是否脱落

第四步：加入3ml培养基终止消化，将细胞吹散，移入15ml离心机管中，1000rpm，离心5min

第五步：取两个新的培养皿，各加入8-10m1培养基，在培养皿上标记细胞名称，日期和所用培养基名称

第六步：离心结束后，用75%的酒精喷管身后，放回工作台中，吸去上清

第七步：取2ml培养基重悬细胞，平均分配到2个皿中，“8字法”摇匀后，镜检是否铺匀

第八步：把培养皿放入C02培养箱中培养，第二天观察贴壁情况

注意事项

1.培养过程中需维持细胞处于对数生长期，80%左右即可传代，传代比例请参照说明书建议

2.消化时间不宜过长，大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化，难消化的细胞可分次消化，每次时间不超过5min

3.培养过程中需要定期换液，一般细胞建议2-3天换液一次