本视频为厦门逸漠生物出品关于细胞冻存步骤指南，我们对每一步操作都做了演示，以便实验者更好地理解细胞冻存实验过程。

细胞冻存实验准备

 提前开启紫外照射30min消毒灭菌，工作台开灯通风10min、用75%酒精擦拭台面

细胞冻存所需试剂物品

细胞培养液，胰酶，PBS， 和无血清细胞冻存液

细胞冻存步骤

 从培养箱拿出细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达80%以上时，可进行细胞冻存操作

 第一步：将细胞培养皿放入超净工作台，吸去上清，沿皿壁加入5ml PBS，轻洗细胞表面，洗去表面培养基，再将PBS吸去

 第二步：加入2ml胰酶，37℃消化1-2分钟，显微镜下观察细胞是否脱落，可轻拍使未脱落细胞脱落

 第三步：加入3ml 培养基终止消化，将细胞吹散，移入15ml离心管中，1000rpm，离心5min

 第四步：取一定量的冻存管，打印标签，写明细胞名称，冻存日期，所用培养基，贴标签

 第五步：离心结束后，用75%的酒精喷管身后，放回工作台中，吸去上清，取1ml无血清细胞冻存液重悬细胞，后移入贴好标签的冻存管中，用封口膜密封管口

 第六步：直接将细胞放入-80度冰箱中，24h后可移入液氮中保存

 注意事项

 1.不同细胞消化时间有差异，以实际镜检结果为准，大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化，消化时间不宜过长

 2.应选择汇合度80%-90%左右，细胞处于对数生长期时进行冻存操作，确保细胞冻存时状态最佳，冻存密度可根据细胞特性进行调整

 3.我们使用的无血清细胞冻存液，可直接冻存细胞于-80度，无需程序降温