细胞凋亡检测试剂盒 (Hoechst 法) 简介

细胞凋亡分析试剂盒（Hoechst染色）提供了一种快速便捷的细胞凋亡检测方法。Hoechst 33258是一种蓝色荧光染料（与dsDNA结合时激发/发射最*值≈352/461 nm），对凋亡细胞中的浓缩染色质染色比正常细胞中的染色质更亮。它在细胞凋亡细胞中显示出强烈的蓝色荧光，但在正常细胞中，它只显示微弱的荧光。

细胞凋亡检测试剂盒 (Hoechst 法) 使用方法

悬浮细胞

1.4ºC，1000 g 离心 3-5 min，收集 105-106 细胞。

2. 加入 0.5 mL Fixative Solution，室温固定 10 min 以上。注：4ºC 固定过夜效果更佳。

3. 4ºC，1000 g 离心 3-5 min，弃去 Fixative Solution，加入 PBS 或 0.9% NaCl 洗涤两次，每次 3 min。 

4. 加入约 50 μL PBS 或 0.9% NaCl 轻轻重悬细胞沉淀，并滴加至载玻片上。

5. 室温下晾干至细胞不会轻易随液体流动。 

6. 加 0.5 mL Hoechst 33258 Stain，染色 5 min。

7. 弃去染色液，用 PBS 或 0.9% NaCl 洗涤两次，每次 3 min。

8. 在载玻片上加一滴 Antifade Mounting Medium，小心盖上盖玻片。注意避免产生气泡。

9. 荧光显微镜下检测荧光强度。注：Hoechst 33258 和双链 DNA 结合后，最*激发波长为 352 nm，最*发射波长为 461 nm。

注意事项及储存

1. 荧光染料都存在淬灭的问题，染色后应尽快检测荧光强度。

2. Hoechst 33258 和 PI 对光敏感，整个实验过程尽量避光下进行。

3. Hoechst 33258 和碘化丙啶（PI）均对人体有害，操作时务必小心。

4.4°C，避光保存6个月;-20°C，可保存1 年。