包涵体蛋白表达是一种在基因工程中常见的现象,主要发生在外源基因在原核细胞,尤其是大肠杆菌中高效表达时。在这种情况下,重组蛋白形成的是由膜包裹的高密度(1.3 mg/ml)不溶性蛋白质颗粒,这些颗粒在显微镜下观察时为高折射区,与胞质中其他成分有明显区别。
包涵体的形成可能与多种因素有关,包括蛋白表达量过高、氨基酸组成、所处的环境以及蛋白的来源等。例如,当蛋白合成速度过快时,可能导致蛋白没有足够的时间进行正确的折叠,二硫键不能正确配对,进而导致蛋白质无法达到足够的溶解度,最终形成包涵体。
由于包涵体中的蛋白是非折叠状态的聚集体,因此不具有生物学活性。为了获得具有生物学活性的蛋白质,包涵体的纯化和复性过程至关重要。包涵体的纯化主要包括样本破碎、洗涤、溶解、复性、纯化以及鉴定几个步骤。其中,复性是一个非常复杂的过程,常用的复性方法包括稀释复性、透析复性、凝胶过滤层析和离子交换层析等。