免疫亲和柱利用抗原抗体特异性可逆结合的原理，将毒素杭体与凝胶共价结合，然后填充柱子。将样品提取溶液过 免疫亲和柱，与抗体分子有特异性结合的黄曲霉毒素被固定，而非目标化合物则沿柱流出，再用甲醇将黄曲霉毒素洗脱，根据待测物分子荧光特性， 用高效液相色谱或专用定量荧光速测仪进行定量检测。
    黄曲霉毒素              赫曲毒素            玉米赤霉烯酮         呕吐毒素
    Aflatoxin B1            Ochratoxin A           Zear alenone       Deoxynivalenol

一，样品制备


参考《GB 5009.22-2016食品安全国家标准食品中黄曲霉凿素B族和G族的测定》。

1, 均质
准确称取20.0g粉碎的样品，加入100ml 70％甲醇 水（体积比）混匀，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min;
2, 提取
提取液用玻璃纤维滤纸过滤或5000r/min离心Smin，取10ml滤液加入20ml水稀释，混匀；
3, 过滤
用快速定性滤纸或玻璃微纤维滤纸或定量滤纸过滤，收集滤液，取15ml

注意：对千样品提取液(pH<6或ph>8)的样品， 需调节pH至中性， 并用玻璃微纤维滤纸／定量滤纸过滤； 对千浑浊难过滤的样品， 可用离心机离心使其分层



二, 呕吐毒素免疫亲和柱样品净化


注意：整个纯化过程尽量不要让柱子液体流干！

（1）取出免疫亲和层析微柱，将上方塞子取出剪断， 再插回亲和柱上
（2）将柱子与泵流操作架上的玻璃针筒连接固定，去掉亲和柱下方堵头，用15ml水或pH7.4磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤1次，流速1.5ml/min;
（3）将处理后的溶液上样， 使 液体以1.5 ml/min的速度流出；
（4）用15ml水或pH7.4磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤2次，流速1.5ml/min, 直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体
（5）用1ml甲醇洗脱，用样品瓶／玻璃试管接洗脱液， 流速1ml/min;
（6）脱后液体可用于检测。

＊每盒产品内附产品使用说明


一，注意事项


（1）黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。凡接触到标样的玻璃器皿都要用5％次氯酸钠浸泡过夜。
（2）不要使用过有效期的免疫亲和柱。
（3）免疫亲和柱应在2~8它保存，不要冷冻。
（4） 使用前，免疫亲和柱需至少提前半小时回温至室温(25℃左右）。
（5）样本AFB1含量高千柱容量时，需适当降低上样体积。
（6）必须保证过柱的样品提取液pH在6~8之间，可用盐酸或氢氧化钠调整。
（7）称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整，建议不少于1



保质期


（1）4℃下保存期可长达两年；
（2）生产日期见外包装盒