猪转录激活因子-5(ATF-5) ELISA 试剂盒  

仅供体外研究使用，不用于临床诊断!

产品规格：96T/48T（可拆）

产品数量：咨询

产品应用：ELISA实验

产品货期：现货

有效期：6个月

保存条件：2-8℃

猪转录激活因子-5(ATF-5) ELISA 试剂盒 

实验原理

酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种基于抗原抗体反应的免疫学检测方法。其基本原理是利用抗原抗体的特异性结合，通过酶对底物反应的显色反应，对样本中的待测物质进行定量或定性分析。ELISA方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、适用范围广等特点，因此在生物医学研究、临床诊断和食品安全检测等领域得到了广泛应用。

样品收集、处理及保存方法

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解 冻并确保样品均匀地充分解冻。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 

标准品的稀释原则：

2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。 如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 

生物su标记抗体的稀释原则：

临用前以生物su标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su标记抗体加990μl生物su标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：

临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

实验步骤

1. 抗原包被：将抗原溶液加入到酶标板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一层薄膜。

2. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的抗原和其他杂质。

3. 阻断：加入阻断液，封闭酶标板孔中的非特异性结合位点，以减少非特异性结合。

4. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的阻断液和其他杂质。

5. 加样：加入待测样本，使其与抗原发生特异性结合。

6. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的样本和其他杂质。

7. 加酶标抗体：加入酶标记的抗体，使其与特异性结合的样本中的待测物质发生反应。

8. 清洗：清洗酶标板，去除未结合的酶标抗体和其他杂质。

9. 显色反应：加入底物溶液，发生酶催化反应，产生有色产物。

10. 终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。

11. 检测：用酶标仪测定各孔的光密度值，记录数据。

ELISA试剂盒实验数据的计算处理方法

1、拟和曲线：

输入第一行： 浓度值， 如0 10 50 100 400

输入第二行：该浓度下的调整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

选择这些输入的数据，用插入里的图表按钮，进入图表向导，在“标准类型”中选择“xy散点图”;在“子图表类型”中选择“折线散点图”，按“下一步”;选择“系列产生在行”，按“下一步”;数据标志，可以填写：如数据y轴，OD值;数据x轴，浓度;按下一步，点击完成。可得曲线图。

单击曲线，按右键，选择“添加趋势线”，在类型中，选择多项式;在选项中，选择显示公式，选择显示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面说的方法： 双击图表，把它输入到图表的数据中，就可以拟和曲线。

2、计算浓度：

第一次实验：

标准曲线为：

y = -4E-05x2 + 0.026x

R2 = 0.9745

为例，已知OD值，计算浓度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：

4E-05x2 -0.026x +y=0

ax2 +bx +y=0

注意事项

1. 实验前请仔细阅读本试剂盒的使用说明，确保所有材料、器具和试剂准备齐全。

2. 为保证实验结果的准确性，请务必遵循实验步骤进行操作，并注意控制实验条件的一致性。

3. 实验过程中请勿触摸酶标板上的酶标抗体区域，以免影响实验结果。

4. 实验结束后请及时清洗并整理实验器具，避免交叉污染。

5. 本试剂盒仅供体外诊断使用，使用前请仔细阅读说明书，如有疑问请及时联系厂家或专业技术人员。

结果判断

 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

什么时候进行ELISA测试时需要准备一系列稀释样本?

1)未知样本浓度:当你不知道样本中抗原或抗体的浓度时，准备一系列稀释样

可以帮助确保至少有一些稀释度落在ELISA的线性检测范围内。

2)避免信号饱和:对于浓度较高的样本，稀释可以防止信号饱和，即吸光度值超

出光度计的最大读数，从而保证结果的线性和准确性。

3)减少高剂量挂钩效应:在某些情况下，过高的抗原浓度会导致检测抗体无法形

成“夹心”结构，反而降低了检测信号，这称为“挂钩效应”。稀释样本可以避免这一

现象。

4)优化检测条件:为了找到最佳的检测条件和稀释度，初步实验通常会涵盖广泛

的稀释范围，以便后续实验可以直接使用最佳稀释度。

5)建立标准曲线:对于定量ELISA，需要使用一系列已知浓度的标准品来建立标准

曲线，未知样本的结果将与此曲线比较以确定其浓度。

6)控制非特异性结合:稀释样本可以减少非特异性结合，这种结合可能在高浓度

样本中更为常见。

7)实验重复性和可比性:为了确保实验的重复性和可比性，对于不同时间点或不

同实验条件下的样本，通常需要准备相同的稀释系列。

8)特殊样本类型处理:某些样本类型(如血清、血浆或含有抑制剂的样本)可能

需要稀释以减少背景干扰或抑制剂的影响。

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