AAT Bioquest  15281  Amplite® 荧光 NADP 检测试剂盒 *蓝色荧光*

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AAT Bioquest 荧光 NADP 检测试剂盒-常备现货

美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助 quan 世 jie 的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。

AAT Bioquest  15281  Amplite® 荧光 NADP 检测试剂盒 *蓝色荧光*  200 Tests，产品简介：

产品品牌：AAT Bioquest

产品货号：15281

产品名称：Amplite® 荧光 NADP 检测试剂盒 *蓝色荧光*

产品规格：200 Tests

AAT Bioquest 荧光 NADP 检测试剂盒-常备现货 

AAT Bioquest  15281  Amplite® 荧光 NADP 检测试剂盒 *蓝色荧光*  200 Tests，产品说明：

烟xian胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和烟xian胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是活细胞中发现的许多酶反应的两个重要辅助因子。NAD通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2'位置，形成NADP。NADP用于合成代谢生物反应，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作为还原剂。在叶绿体中，NADP是一种氧化剂，在光合作用的初步反应中很重要。光合作用产生的NADPH被用作光合作用加尔文循环中生物合成反应的还原能力。量化这些因素的产生或消耗是监测酶介导反应或筛选这些酶反应的调节剂或底物的重要方法。市场上有几种试剂盒可以量化NADPH或NADP / NADPH总量，但是迄今为止，在存在大量过量NADPH的情况下检测NADP生成一直非常具有挑战性，因为NADP的吸收峰在260nm处并且不发出荧光，这使得测量不切实际。Amplite®荧光NADP检测试剂盒可灵敏快速地检测NADP。该试剂盒使用我们新开发的NADP传感器Quest Fluor™ NADP试剂直接测量NADP。该试剂盒中使用的专有探针仅与NADP反应，以产生在特定激发和发射光谱范围内发出荧光的产物，并且对NADPH几乎没有反应。该试剂盒可在 30 μL 测定体积中检测低至 100 nM NADP，并在存在过量 NADPH 的情况下监测 0.3% NADP 生成。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行，可用于高通量筛选。

平台

荧光酶标仪

Excitation：420 纳米

Emission：480 纳米

Cutoff：455 纳米

推荐板：纯黑色

组件

组件A：Quest Fluor™ NADP Probe  1 瓶 （5 mL）

组分B：检测溶液       1 瓶 （5 mL）

组分C：增强剂溶液    1 瓶 （3.5 毫升）

组件D：NADP标准    1 瓶 （389 μg）

1.     制备 NADP 标准品或测试样品 （50 μL）

2.     添加 20 μL Quest 福陆™ NADP 探针

3.     加入 20 μL 检测液

4.     在室温下孵育 10 - 20 分钟

5.     添加 15 μL 增强剂溶液

6.     在室温下孵育 10 - 20 分钟

7.     监测 420/480 nm 处的荧光（截止值 = 455 nm）

重要说明：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组件。

储备液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

1. NADP 标准溶液 （1 mM）：

加入 500 μL ddH2O放入NADP标准品（组分D）的小瓶中，制成1mM NADP标准溶液。

标准溶液的制备

NADP 标准

将 10 μL 1mM NADP 标准溶液加入 990 μL H 中2O 或 1X PBS 缓冲液以生成 10 μM NADP 标准溶液 （NS7）。取 10 μM NADP 标准溶液 （NS7），在 H 中进行 1：3 连续稀释2O 或 1X PBS 缓冲液以获得连续稀释的 NADP 标准品 （NS6 - NS1）。注意：稀释的NADP标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

实验方案样本

表 1.NADP标准品和测试样品在黑色/实心底部96孔微孔板中的布局。NS=NADP标准品（NS1-NS7，0.01至10μM）;BL = 空白控件;TS=测试样品。

1.     根据表1和表2中提供的布局制备NADP标准品（NS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂而不是 50 μL。

2.     将 20 μL Quest Fluor™ NADP Probe（组分 A）溶液加入 NADP 标准品、空白对照和测试样品的每个孔中，充分混合。对于 384 孔板，改用 10 μL Quest Fluor™ Probe（组分 A）溶液。

3.     向每个孔中加入 20 μL 测定溶液（组分 B），充分混合。对于 384 孔板，改用 10 μL 检测溶液（组分 B）。

4.     将反应在室温下孵育10-20分钟，避光。

5.     向每个孔中加入 15 μL 增强剂（组分 C），使 NADP 测定总体积为 105 μL/孔。对于 384 孔板，改为添加 7.5 uL 增强剂（组分 C），总体积为 52.5 μL/孔。

6.     在室温下孵育 10 - 20 分钟，避光。

7.     用荧光酶标仪在420/480nm处监测荧光增加（截止= 455nm）。

产品订购信息：

15281  Amplite® 荧光 NADP 检测试剂盒 *蓝色荧光*  200 Tests