AAT Bioquest 15273/15274 Amplite®比色NAD/NADH（NADP/NADPH）比值测定试剂盒

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AAT Bioquest 比值测定试剂盒-常备现货

美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AAT Bioquest的产品帮助 quan 世 jie 的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AAT Bioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。

AAT Bioquest  15273  Amplite® 比色 NAD/NADH 比值检测试剂盒  250 Tests

AAT Bioquest  15274  Amplite® 比色法 NADP/NADPH 比值检测试剂盒  250 Tests

AAT Bioquest 比值测定试剂盒-常备现货 

AAT Bioquest  15273  Amplite® 比色 NAD/NADH 比值检测试剂盒  250 Tests，产品说明：

烟xian胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和烟xian胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是细胞中发现的两种重要的辅助因子。NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。它通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的 2' 位置以形成 NADP。NADP用于合成代谢生物反应，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作为还原剂。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定是通过监测340nm处的NADH或NADPH吸收来完成的。该方法灵敏度低，干扰高，因为测定是在需要昂贵的石英微孔板的紫外范围内进行的。我们的 Amplite® NAD/NADH 比率检测试剂盒为灵敏检测 NAD、NADH 及其比率提供了一种方便的方法。NADH探针是一种显色传感器，在NADH还原时在~460nm处具有最大吸光度。~460nm处的吸光度增加与溶液中NADH的浓度成正比。NADH探针可以在无酶反应中识别NADH，并且吸光度酶标仪可以在~460nm处轻松读取信号。Amplite® 比色 NADH 检测试剂盒提供灵敏的检测方法，可在 3 μL 检测体积中检测低至 100 μM NADH。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行。

平台

吸光度酶标仪

吸光度 460 纳米

推荐板 清除底部

组件

组分A：NAD/NADH回收酶混合物    2瓶（冻干粉）

组件 B-I：NADH 探头     1 瓶 （4 mL）

组件 B-II：NADH 探针缓冲液      1 瓶 （16 mL）

组件C：NADH标准（FW：709）      1 瓶 （142 μg）

组分D：NAD提取溶液     1 瓶 （10 mL）

组分E：中和溶液  1 瓶 （10 mL）

组件F：提取控制解决方案 1 瓶 （10 mL）

组分G：裂解缓冲液    1 瓶 （10 mL）

一目了然

协议摘要

1.     准备 25 μL NADH 标准品和/或测试样品

2.     加入 25 μL NAD 提取溶液

3.     37岁孵化oC 15 分钟

4.     加入 25 μL 中和溶液

5.     加入 75 μL NAD/NADH 工作溶液

6.     在室温下孵育 15 分钟至 2 小时

7.     监测 460 nm 处的吸光度

重要说明

强烈建议在37°C下用裂解缓冲液（组分G）孵育细胞，并使用上清液进行实验。

在开始实验之前，在室温下解冻每种试剂盒组分之一。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环

NADH 标准溶液 （1 mM）

将 200 μL 1X PBS 缓冲液加入 NADH 标准品（组分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） NADH 标准溶液。

标准溶液的制备

NADH标准

将 50 μL 1 mM （1 nmol/μL） NADH 标准溶液加入 450 μL 1X PBS 缓冲液 （pH 7.4） 中，生成 100 μM （100 pmols/μL） NADH 标准溶液。然后取100μM NADH标准溶液，在1X PBS缓冲液中进行2：1连续稀释，以获得连续稀释的NADH标准品（NS1 - NS7）。注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

工作溶液的制备

将 8 mL NADH 探针缓冲液（组分 B-II）加入 NAD/NADH 回收酶混合物（组分 A）瓶中，并充分混合。

将 2 mL NADH 探针（组分 B-I）加入组件 A+B-II 的瓶中，充分混合制成 NAD/NADH 工作溶液。

注意 这种NAD / NADH工作溶液足以进行125-200次测定。工作溶液不稳定，及时使用，避免直接暴露在光线下。

注意 可以尝试使用ddH 2 O（例如500 uL）溶解组分A，然后按比例与B-II和B-I混合，以使NAD / NADH工作溶液仅供充分使用。

AAT Bioquest  15274  Amplite® 比色法 NADP/NADPH 比值检测试剂盒  250 Tests产品说明：

烟xian胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和烟xian胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是细胞中发现的两种重要的辅助因子。NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。它通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的 2' 位置以形成 NADP。NADP用于合成代谢生物反应，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作为还原剂。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定是通过监测340nm处的NADH或NADPH吸收来完成的。该方法灵敏度低，干扰高，因为测定是在需要昂贵的石英微孔板的紫外范围内进行的。我们的 Amplite® NADP/NADPH 比率检测试剂盒为灵敏检测 NADP、NADPH 及其比率提供了一种方便的方法。NADPH探针是一种显色传感器，在NADH还原时在~460nm处具有最大吸光度。~460nm处的吸光度增加与溶液中NADPH的浓度成正比。NADPH探针可以在无酶反应中识别NADPH，并且吸光度酶标仪可以在~460nm处轻松读取信号。Amplite® 比色法 NADPH 检测试剂盒提供灵敏的检测方法，可在 3 μL 检测体积中检测低至 100 μM NADPH。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行。

平台

吸光度酶标仪

吸光度 460 纳米

推荐板 清除底部

组件

组分A：NADP / NADPH回收酶混合物    2瓶（冻干粉）

组件 B-I：NADPH 探头   1 瓶 （4 mL）

组分 B-II：NADPH 探针缓冲液    1 瓶 （16 mL）

组件C：NADPH标准 1 瓶 （167 μg）

组分D：NADP提取液 1 瓶 （10 mL）

组分E：中和溶液  1 瓶 （10 mL）

组件F：提取控制解决方案 1 瓶 （10 mL）

组分G：裂解缓冲液    1 瓶 （10 mL）

1.     准备 25 μL NADPH 标准品和/或测试样品

2.     加入 25 μL NADP 提取溶液

3.     在37°C孵育15分钟

4.     加入 25 μL 中和溶液

5.     加入 75 μL NADP/NADPH 工作溶液

6.     在室温下孵育 15 分钟至 2 小时

7.     监测 460 nm 处的吸光度

重要说明

强烈建议在37°C下用裂解缓冲液（组分G）孵育细胞，并使用上清液进行实验。

在开始实验之前，在室温下解冻每种试剂盒组分之一。

储备溶液的制备

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环

NADPH 标准溶液 （1 mM）

将 200 μL PBS 缓冲液加入 NADPH 标准品（组分 C）的小瓶中，以获得 1 mM （1 nmol/μL） NADPH 储备溶液。

标准溶液的制备

NADPH 标准

将 10 μL 1 mM NADPH 储备溶液加入 490 μL PBS 缓冲液 （pH 7.4） 中，生成 20 μM （20 pmols/μL） NADPH 标准溶液。然后取20μM NADPH标准溶液并进行1：2系列稀释，以获得剩余的连续稀释NADPH标准品（NS7 - NS1）。注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

工作溶液的制备

1.     将 8 mL NADPH 探针缓冲液（组分 B-II）加入 NADP/NADPH 回收酶混合物（组分 A）瓶中，并充分混合。

2.     将 2 mL NADPH 探针（组分 B-I）加入同一瓶中（来自步骤 1）并充分混合。

注意此NADP / NADPH工作溶液足以进行125-200次测定。工作溶液不稳定，及时使用，避免直接暴露在光线下。

产品订购信息：

AAT Bioquest  15273  Amplite® 比色 NAD/NADH 比值检测试剂盒  250 Tests

AAT Bioquest  15274  Amplite® 比色法 NADP/NADPH 比值检测试剂盒  250 Tests