产品特点：

• 在宽的RNA起始量范围内，RT-qPCR结果的一致性更高，cDNA合成效率更高
• 方便的预混液形式，可降低移液差异
• 包含用于RT-qPCR的dsDNase和no-RT对照，可控制RNA制备中的gDNA污染风险

技术细节：

• 在96-基因检测板阵列中，cDNA合成效率始终较高
• 在较宽的动态范围（1 pg-1 μg的总RNA）内，cDNA合成呈更高线性度
• 在42°C-55°C的反转录过程中保持完整的酶活性

在较宽的动态范围内具有高转录效率

Maxima H Minus cDNA合成预混液可在较宽的模板浓度范围内保持高转录效率和良好的线性（图1）。良好的线性表明，无论使用大量还是少量起始RNA，都能可靠代表不同转录物的相对数量。

图1. Maxima H Minus cDNA合成预混液的广泛动态范围。标准曲线在宽的起始RNA范围内具有高度线性度（R2 = 0.999），这表明无论总RNA丰度是多少，特定RNA转录物的相对代表性在cDNA库中得以保留。将HeLa细胞总RNA进行10倍连续稀释（1 μg至0.1 pg），然后对人18S RNA基因进行扩增。使用Maxima H Minus cDNA合成预混液生成链cDNA。使用Thermo Scientific Luminaris Probe qPCR预混液（低ROX），在Applied Biosystems ViiA 7实时PCR系统上扩增cDNA。
 

一致的转录效率

在使用少量和大量起始RNA时，Maxima H Minus cDNA合成预混液都比其他品牌的反转录酶具有更高的效率（图2）。转录效率越高，RNA使用量越少，并且能够准确检测低表达的转录物。

图2. Maxima H Minus cDNA合成预混液的转录效率更强。在广泛的RNA起始量范围内，Maxima H Minus cDNA合成预混液比其他品牌的反转录酶具有更高的效率。将HeLa细胞总RNA进行10倍连续稀释（1 μg to 0.1 pg），然后对人18S RNA基因进行扩增。使用Maxima H Minus cDNA合成预混液、用于RT-qPCR 的Thermo Scientific Maxima链cDNA合成试剂盒以及来自其他四家供应商的反转录酶，生成链cDNA。使用Luminaris Probe qPCR预混液（低ROX），在ViiA 7实时PCR系统上扩增cDNA。扩增曲线表示ΔRn随循环数的变化。
 

对靶标阵列实现一致、可靠的转录

使用Maxima链cDNA合成试剂盒得到的RT-qPCR数据进行归一化处理后发现，在RT-qPCR中96个靶基因中，Maxima H Minus cDNA合成预混液始终比其他供应商的反转录酶预混液具有更高的效率（图3）。

图3. C_t值一致降低。在广泛的靶标范围内，Maxima H Minus cDNA合成预混液比其他市售预混液具有更高的cDNA合成效率。使用96基因Applied Biosystems TaqMan®检测板和100 ng HeLa总RNA起始量，将Maxima H Minus cDNA合成预混液与Thermo Scientific Maxima First Strａnd cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR以及其他品牌的预混液进行比较。以Maxima First Strａnd cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR作为对照，得到检测板中96个基因的ΔCt值（ΔC_t = Maxima H Minus cDNA 合成预混液或其他市售产品的C_t – 用于RT-qPCR 的Maxima First Strａnd cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR的C_t）。

完整的cDNA合成工作流程解决方案

Maxima H Minus cDNA合成预混液具有双链特异性DNA酶（dsDNase），与传统DNase I相比，可更快、更高效和更地去除gDNA。dsDNase处理的RNA样品未显示出RNA完整性和数量的降低。在cDNA合成之前使用dsDNase处理，可限度降低使用传统DNase I净化样品带来的损失风险。

Maxima No-RT 对照混合物将与Maxima H Minus反转录酶预混液一起提供，从而为2步法RT-qPCR提供完整的cDNA合成解决方案。这种No-RT 对照混合物包含反转录预混液中除Maxima H Minus反转录酶以外的所有成分，使研究人员能够准确确定无残留的gDNA污染。

订购信息

查看更多Maxima反转录产品信息，/maxima。

查看