各种动物外周血中性粒细胞分离液试剂盒
规格：200 mL/kit
保存：本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期 2 年。无菌开封后，保存于室温。
试剂盒组成：
试剂A 200mL
试剂C 100mL
细胞洗涤液 200mL
红细胞裂解液 100mL
操作步骤：
1. 取新鲜抗凝全血，血液体积小于5mL时，在离心管中先加入4mL试剂A，后将2mL试剂C小心叠
加于试剂A之上，形成梯度界面（血液体积大于等于5mL，试剂A与试剂C比例2：1，试剂总量与稀
释后的样本量相等。但二者的总体积不能超过离心管的三分之
二，否则会影响分离效果），将血液平铺到分离液液面上方，
注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，
然后将血液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将
形成明显的分层界面。如果样品较多，加样的时间较长，在离
心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。）
2. 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min（血液的体积
越大所需的离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸
索，离心转速最大不超过1200g）。
3. 离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细
胞为单个核细胞层，下层细胞为中性粒细胞层，如图所示（个
体差异或者是分离条件不同，粒细胞层可分离不明显）。
4. 用吸管小心吸取试剂C与试剂A之间以及试剂A中的中性
粒细胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤
细胞。250g，离心10min（如有红细胞混杂则加入适量红细胞
裂解液）。
5. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心
10min。
6. 重复步骤6
7. 弃上清，细胞重悬备用。
注意事项：
A. 开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免
微生物污染。。
B. 分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是
分离示意图
血浆层
单个核细胞层
试剂 C
试剂 A
红细胞层
中性粒细胞层
温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
C. 血液样本最好为新鲜抗凝血（采血2 h以内），为保持淋巴细胞的活性，应避免冷冻和冷藏。
D. 血液样本不需稀释，直接进行分离即可。
E. 稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，
大大降低细胞得率及纯度。
F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。
G. 血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸
索最佳的分离条件。
H. 如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生
物污染。
I. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提
供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。
