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各种动物外周血中性粒细胞分离液 KIT 说明书

上海易佰聚经贸有限公司 >> 进入商铺

2016/5/3 11:13:07

【产品规格200ml/Kit

【产品组成】

为方便广大用户使用,试剂内容如下:

 

 

 

 

名称

产品编号

 

规格

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

A

试剂 A

 

 

 

 

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

B

清洗液(赠品)

 

 

2010X1118

 

200ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

C

红细胞裂解液(赠品)

NH4CL2009

 

100ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

D

说明书

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【实验前准备】

 

 

 

 

 

 

 

A 适用仪器

 

 

 

 

 

 

 

 

zui大离心力可达 1200g 的水平转子离心机

 

 

 

 

 

B 耗材

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

产品名称

 

产品货号

 

产地

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15ml 离心管散装

 

339650

 

美国 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15ml 离心管架装

 

339651

 

美国 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

50ml 离心管散装

 

339652

 

美国 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

50ml 离心管架装

 

339653

 

美国 NUNC

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

无菌胶头滴管或塑料滴管

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

【检验方法】

 

 

 

 

 

 

 

 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。根据样本量大小,分以下两种情况:

 情况 A:血液样本量小于 5ml 时,实验方法如下:

 

 1. 取一支 15ml 离心管,小心加入 5ml 试剂 A。

 2. 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上,400-550g ,离心 20-30min(注:如改变血液样本及分离液用量,需相应调整离心力及离心时间,具体离心条件需客户自行摸索,以达到*分离效果。)

3. 离心后,离心管中将出现两层环状乳白色细胞层,上层细胞为单个核细胞层,下层细胞为中性粒细胞层。

 4. 用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层,如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液(产品编号:NH4CL2009)将红细胞裂解(具体方法见“红细胞裂解液使用说明”)即得目的细胞。

 5. 将获得的细胞层移至另一 15ml 离心管中,向所得离心管中加入 10ml 清洗液(产品编号:2010X1118),混匀细胞。

 6. 250g,离心 10min。

 7. 弃上清。

 8. 用吸管以 5ml 清洗液(产品编号:2010X1118)重悬所得细胞。

 9. 250g,离心 10min。

 10. 重复 7、8、9,弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

 情况 B:血液样本量大于等于 5ml 时,实验方法如下:

 

 1. 取一支适当的离心管,依次小心加入试剂 A,试剂总量与稀释后的样本量相等。

 2. 将血液样本小心加于分离液之液面上,450-650g(zui大离心力可至 1000g),离心 20-30min。(注:根据血液样本量确定离心条件,血液量越多,离心力越大,离心时间越长,具体离心条件需客户自行摸索,以达到*分离效果。加入血液样本后,样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二)。

 3. 剩余步骤同“情况 A”中步骤 3 至步骤 10。

 【注意事项】

 

 1. 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得*的实验结果,在取血 2h 内进行实验,血液存放时间越长,细胞分离效果越差。血液放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

 2. 本实验不使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品,因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面,影响细胞分离效果。

 3. 分离液用量大于血液样本时,分离效果更佳。

 4. 血液样本不需稀释,直接进行分离即可。

 5. 如实验后细胞得率或活性过低,请TBD以寻求帮助。

 【储存条件及有效期】

 

18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启封后置常温保存。如 4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。

 【参考值(参考范围)】

 

 本实验中性粒细胞提取率大于 80%。

 下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例,用户可适当进行参考。

 

 

红细胞

 

白细胞

 

血小板

 

 

 

 

 

 

 

 

4.0-10.0)×109

 

含量(个/L

4.0-5.5)×1012

中性粒细胞

淋巴细胞

单核细胞

1.0-3.0)×1011

 

 

50%-70%

20%-40%

3%-8%

 

 

 

 

 

 

 

【相关实验技术方案】

 

 

 

 

1. 所获得中性粒细胞的培养技术。

2. 所获得中性粒细胞的核酸提取技术。

3. 所获得中性粒细胞的鉴定方法

A.流式细胞技术

B.免疫组化技术

C.原位杂交技术

D.PCR 技术

【可能存在的问题及解决方法】

 

 1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示:

 

出现情况

出现原因

建议解决方案

 

 

 

离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层

转速过小或离心时间过短

适当增减转速

 

 

离心后目的细胞存在于分离液中

转速过大或离心时间过长

 

 

 

 

离心后白环层弥散

细胞密度过大

调整细胞密度

 

 

离心后白环层太浅或看不见

细胞密度过小

 

 

 

 

 2. 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心,其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时,恒定离心时间,对离心转速进行调整。

 3. 本分离液依照标准,全部使用药用级原料,性能指标与国产同类产品略有不同,可能出现红细胞沉降不*的情况,可以适当加大离心转速。

 注:在对离心条件进行调整时,离心转速的加减以 50-100g 为基数,直至达到*分离效果,

 

 

 

 离心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。

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