即使蛋白酶对细胞功能很重要，但你也有不想见到它们的时候。比如，在纯化蛋白质的时候，你可不想让蛋白酶大肆吞噬你的目标蛋白吧，特别是低丰度蛋白。如今，市场上有多种蛋白酶抑制剂可供选择，帮助你在必要时停止蛋白酶的活性。
为了对付细胞和组织样品中存在的各种蛋白酶，抑制剂的选择也在不断增加。目前，主要有四种类型的蛋白酶，根据他们活性位点中的氨基酸命名：丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金属蛋白酶。蛋白酶抑制剂可以特异针对一种蛋白酶，也可以是广谱的。
人们通常根据抑制剂作用的蛋白酶类型，以及它们可逆或不可逆，对蛋白酶抑制剂进行分类。如何选择和使用？这似乎是一个难题，光看名字就已经让人头晕了。下面让我们来听听专业人士的建议。
从鸡尾酒开始
蛋白酶抑制剂的选择，取决于每个用户的个性化实验，不过对于裂解细胞或匀浆组织的应用，抑制剂混合物（或者说鸡尾酒）通常是个比较保险的选择，可阻断不同的蛋白酶。Abbexa畅销的抑制剂就是两种混合物：Protease Inhibitor Cocktail Multipurpose以及Protease, Phosphatase & PMSF；这两者都适用于裂解液。“它们普遍适用，适合许多样品，无论是新鲜还是FFPE组织，抑或不同的物种，”Abbexa的经理Sabrina Calabressi谈道。
若研究人员希望保留目的蛋白，同时维持细胞健康，默克密理博的高级经理Chandra Mohan也建议使用抑制剂混合物。她建议选择针对四种蛋白酶的抑制剂，如默克密理博的Protease Inhibitor Cocktail III。它可抑制哺乳动物细胞和组织中的天冬氨酸、半胱氨酸和丝氨酸蛋白酶以及氨肽酶。
有时，不那么特异的抑制剂似乎是个更好的选择。“在裂解细胞或制备组织匀浆液时，最好使用具有广谱特异性的抑制剂，”Mohan说。“它们应当快速反应，与蛋白酶不可逆结合，并在蛋白纯化后轻松去除。”
尽管如此，选择困难症还是围绕着你。Abbexa认为，尝试不同的类型是供应商的责任，而不是研究人员的。这家公司建议你和供应商交流，让他们将利用自己的专业知识来帮你选择。通常，Abbexa在了解研究人员的特定分析、样品类型和应用之后，才推荐最佳的抑制剂。
考虑作用机制
对于某些类型的实验，你也许要在更小的范围内搜索抑制剂。根据Mohan的建议，你需要先确定阻断的是哪种类型的蛋白酶，然后再选择合适的抑制剂。因为不同的抑制剂有不同的作用机制。
“蛋白酶抑制剂可能是可逆的，也可能是不可逆的，它们通过空间位阻来防止底物靠近活性位点，”Mohan说。其他蛋白酶抑制剂抑制剂可能通过修饰蛋白酶活性位点的氨基酸来发挥作用。“比如，PMSF可让丝氨酸蛋白酶失活，它与活性丝氨酸发生反应，其中氯＋基酮衍生物与活性位点中的催化三联体反应，”Mohan谈道。
先广泛，后具体
如今，抑制剂用在各种各样的应用中，这也是人们需要谨慎选择的一个原因。“下游的处理和分析，将决定蛋白酶抑制剂的选择和使用，”Sigma-Aldrich的市场部经理Robert Gates谈道。例如，他补充说，“液相蛋白质组分析（如血清）可能需要蛋白酶的立即抑制，因为它们会水解低丰度的目标蛋白。”
事实上，目前有这么多类型的抑制剂，将它们分门别类还真是很困难。在选择蛋白酶抑制剂时，Gates建议从广泛的开始，然后不断缩小范围。“第一步可能是尝试预先配置的鸡尾酒，比如Sigma-Aldrich的P8340，专为哺乳动物的组织而设计的，”他说。“如果蛋白水解仍然存在，可以采取针对特定组织和蛋白的方法。”
我们是否能使用更少的抑制剂来抑制更多的蛋白酶，这还有待观察。不过，在这么多的选择中，你肯定能找到一种有效的蛋白酶抑制剂，这是毫无疑问的。
来源：生物通
