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梅里埃 API20E肠杆菌和其他非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒说明书

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2021/12/10 17:31:15

肠杆菌和其他非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒(比色法)说明书

【产品名称】 通用名称:肠杆菌和其他非苛养革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒(比色法)

英文名称:API 20 E

【包装规格】 25 测试/盒、100 测试/盒。

【预期用途】 该产品用于肠杆菌和其它非苛养革兰氏阴性杆菌的鉴定。 该产品用于可导致腹泻、血流感染、尿路感染等的肠杆菌和其它非苛养革兰氏阴性杆菌的鉴定,临床常 见样本来源有粪便、直肠拭子、尿、血等。

【检验原理】 API 20 E 试条由 20 个含干燥底物的微量小管组成。将菌悬液接种到管内,使小管内底物溶解。孵育过 程中,所产生的代谢产物通过自发反应或加入附加试剂后而变色。鉴定结果可根据说明书的判读表进行 读出,也可参照生化谱检索手册或鉴定软件,得到鉴定结果。

【主要组成成分】 

试剂盒组成(用于 25 个敏感性测试) 

- 25 API 20 E 试条 

- 25 个孵育盒 

- 25 张结果报告单 

- 1 个封口夹 试剂盒组成(用于 100 个敏感性测试) 

- 100 API 20 E 试条(4x25 试条) 

- 100 个孵育盒 - 100 张结果报告单 

- 1 个封口夹 试剂条成分 

API 20 E 试条的成分请参阅说明书后的结果判读表。

需要但没有提供的试剂和材料 

试剂 

- 0.85 % API NaCl 培养基,5 mL (Ref. 20 230)API 悬浮培养基,5 mL (Ref. 20 150)

- API 20 E 试剂盒(Ref. 20 120)或 单个的试剂:

TDA (Ref. 70 402) 

JAMES (Ref. 70 542) 

VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) 

NIT 1 +NIT 2 (Ref. 70 442) 

- Zn 试剂(Ref. 70 380)  

- 氧化酶(Ref. 55 635*)

*某些国家不销售此产品:请使用相近的试剂。 

- 矿物油(Ref. 70 100)

材料:

- 吸管或 PSI 管 

- 安瓿保护套 

- 安瓿架

【储存条件及有效期】 2~8°C 保存,有效期为 18 个月。

试条采用铝袋包装并附有干燥剂。有效期为 18 个月。

一旦打开铝袋(*),请使用封口夹(试剂盒己含有)重新封口,以保证试条的干燥:把铝袋撕开处末端放入 打开的夹子并小心的加紧两端。开启铝袋后,在 2~8°C 环境并封好口的环境下,试条可享有 10 个月的 有效期(或包装盒上的有效期,以较短时间为准)

*)建议开封的方法: 在封口下方剪开铝箔装,为防止意外损坏干燥剂,开封时应保持铝箔袋垂直。 

生产日期:详见外包盒标签。 

有效期至:详见外包盒标签。

【适用仪器】 

- API 20 E 数值分析图谱(Ref. 20 190)或鉴定软件。 

- 微生物实验室常规设备

【样本要求】 

API 20 E 不能直接用于临床或其他标本(例如血样,尿样和粪样、直肠拭子等等)。需要进行鉴定的微 生物必须首先根据标准微生物处理技术于适合肠杆菌和/或非苛养革兰阴性杆菌生长的培养基上分离培 养。 

【检验方法】

氧化酶试验: 必须按照制造商的使用说明进行氧化酶试验。由于它是最终图谱的组成部分,请将其结果记录于报告单 上(第二十一个试验)。 

试条的准备 

准备一个培养盒(盘和盖子),倒入约 5mL 蒸馏水或软化水

【或其它不含添加剂或不含有能产生挥发 性气体(如 Cl2, CO2,等)的化学物质的水】于盘的蜂窝小凹中,造成一个湿室。 

在盘的长边写上菌株号(不要写在盖上,因为操作过程中很容易将盖子放到其它试条上) 

从包装中取出试条。

将试条置于培养盒中。 注意:API 20 E 只能用于肠道细菌和或非苛养的革兰阴性杆菌。苛养菌由于对营养有特殊要求并且需要 合适的防护措施(例如布鲁氏菌属 Brucella 和法朗西丝菌属 Francisella),这些菌没有包括在 API 20 E 据库中。 必须采用其它方法,来排除或确认这些菌的存在。 接种物的准备 

根据警告及注意一栏所列方法打开一安瓿 API 0.85% NaCl 培养基(5mL)或一安瓿 API 悬浮培养(5  mL), 或用含 5mL 0.85 NaCl 盐水或不含添加剂的无菌蒸馏水。

用吸管或 PSIpette 从分离平板上挑取单个分纯菌落至悬浮基物中。建议使用新鲜培养物(18-24 时)。

仔细研匀以达到均一的细菌悬液。 制备好的菌悬液必须立即使用。 注意:大多数弧菌(Vibrio)均嗜盐,如怀疑菌株为弧菌,请使用 0.85% NaCl (5mL)培养基。

试条的接种 

用同一根吸管,将菌悬液加入到试条的小管内。为避免在小管的基底部形成气泡,请将试条轻微向前 倾斜并把吸管或者 PSI 管紧靠小杯边缘加入菌液): 

- CITVP GEL 小管,菌液需充满的管部和杯部。 

- 其它管仅充满管部(不是杯部)。 

- 在试验 ADH, LDC, ODC, H2S URE 小杯内加入矿物油以形成厌氧环境。

盖上培养盒。于 36±2℃孵育 18~24 小时。

【阳性判断值】 

请参考本说明书后的反应鉴定表,表中列出了各种生化反应预期结果范围。

【检验结果的解释】 

试条的判读 

孵育后,根据判读表表判读各反应结果。

如果 3 个或 3 个以上测定(GLU 试验+-)为阳性结果,记录所有自发反应于结果报告单上并观察需 附加试剂的试验的结果:

- TDA 试验:加 1 TDA 试剂。深褐色为阳性反应,记录于报告单上。 

- IND 试验:加 1 JAMES 试剂。整个反应管出现粉红色者为阳性,记录于报告单上。 

- VP 试验:加 1 VP 1 1 VP 2 试剂。至少等待 10 分钟,出现粉红红色者表明为阳性结果, 记录于报告单上。如浅粉红色在 10 12 分钟内出现,判断结果为阴性。 注意:吲哚产生试验必须最后进行,因为该反应释放的气体产物会千扰试条的其他试验。在加入附加 试剂后,请小心勿调换培养盒盖。

如果加入附加试剂前阳性结果(包括 GLU 试验)的数量少于 3 个: 

- 重新培养 24 小时(土 2 小时),且不要加任何试剂。

- 重新进行需要加入附加试剂的试验(如前说明)。 

- 为了完成鉴定,可能需要进行补充试验(参考有关鉴定的段落)。 解释 鉴定结果根据数值编码获得。 

数值编码的确定: 在结果报告单,每 3 个试验为一组,每个阳性试验分别赋予数值 12 4,在每组中,阳性反应以相 应的数值相加,由此可得到一个 7 位数字的编码。

氧化酶反应构成第 21 个试验,如阳性则赋予数值 4。 

鉴定: 鉴定结果是根据数据库(V4.1)得到。 *根据鉴定检索手册: 

- 从检索手册中查找数值编码。 *根据 apiweb TMM鉴定软件: - 在键盘上输入 7 位数字的数值编码。 在某些情况下,7 位数字的数值编码还不能区分细菌,必须进行以下一些补充试验来进一步的鉴定: 

- 硝酸盐还原到亚硝酸盐(NO2)和氮气(N2):各加一滴 NIT 1 NIT2 试剂于葡萄糖(GLU 管内,待 2~3 钟后,红色表示阳性结果(NO2)。阴性反应(黄色)可能由于还原至 N2 (有时还有气泡):加 2-3mg 粉到葡萄糖(GLU)管,5 分钟后,如果管保持黄色表示阳性结果(N2),记录于报告单。如果变为橘红, 则是阴性反应:仍留在管内硝酸盐被锌粉还原。该反应对检测革兰阴性、氧化酶阳性的杆菌有用。 

注意:出于和吲哚试验同样的原因(参考试条的判读中的注意项),硝酸盐还原试验必须最后进行。 

- 动力(MOB):接种一安瓿 APIM 培养基(参见产品说明书)


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