三色染色是结缔组织染色的经典方法，它是显示组织中纤维的主要方法之一，也是胶原纤维染色的经典技术方法。这种方法的染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关：分子的大小是由分子量来反映的，小分子容易穿透结构致密、渗透性低的组织；高分子量只能进入结构松散、渗透性高的组织。Masson三色染色试剂盒染色的胶原纤维、粘液和软骨呈蓝色（如淡绿色溶液为绿色）；细胞质、肌肉、纤维素和神经胶质呈红色；核为蓝紫色。
Masson三色染色试剂盒操作步骤：
1、切片常规脱蜡至水，用制备好的魏格特铁苏木素染色5～10min。
2、用酸性乙醇分化液进行分化，用水洗涤。
3、用马松蓝溶液回蓝，用水洗涤。
4、用蒸馏水洗涤1分钟。
5、品红品红染色液5~10分钟。
6、上述操作中，按蒸馏水：弱酸溶液=2：1的比例配制弱酸工作溶液，用弱酸工作溶液洗涤1min。
7、用磷钼酸溶液洗涤1～2min。
8、用配制好的弱酸工作液洗涤1min。
9、直接在苯胺蓝染色液中染色1~2分钟。
10、用配制好的弱酸工作液洗涤1min。
1、95%乙醇的快速脱水。无水乙醇脱水3次，每次5～10s。
12、二甲苯透明3次，每次1～2min。中性口香糖密封。
Masson三色染色试剂盒注意事项：
1、切片脱蜡应尽可能干净。固定起着重要作用，使用不同的固色剂可以延长或缩短染色时间。
2、取A1和A2等量混合，即为魏格铁苏木素染色液。一般24小时内就会失去染色力。
3、酸性乙醇的分化时间应根据切片的厚度、组织的种类和新旧程度来确定。
4、弱酸溶液可使颜色更清亮。如大量使用，可用0.1～0.3%的醋酸溶液代替。
5、磷钼酸分化应在显微镜下控制，胶原纤维和纤维可分化为淡红色和红色。分化时间取决于染色深度，一般为1~2min。
6、Masson蓝液也可用Scott蓝液或0.1～1%水溶液代替。
