一、常见问题
染色效果不佳
可能原因：抗体浓度过低、孵育时间过短、试剂超过有效使用期、室温过低等。
解决方法：
提高抗体浓度，确保孵育时间不少于60分钟。
及时更换过期的试剂。
若室温低于15℃，应改放在37℃孵育箱孵育30-60分钟。
非特异性背景染色
可能原因：操作过程中冲洗不充分、组织中含过氧化物酶未阻断、血清蛋白封闭不充分等。
解决方法：
每步冲洗3×5分钟，确保冲洗充分。
配置新鲜3%H2O2封闭，并延长孵育时间。
使用正常非免疫动物血清再封闭，并延长血清蛋白封闭时间。
染色阴性
可能原因：操作步骤错误、组织中无抗原、一抗与二抗种属连接错误等。
解决方法：
重新试验，设立阳性对照。
设立阳性对照片，以验证实验结果。
仔细确定一抗与二抗种属无误。
试剂配置不当
可能原因：配置过程中未按说明书操作，导致试剂浓度过高或过低。
解决方法：
严格按照说明书操作，确保试剂浓度准确。
切片处理不当
可能原因：切片染完后，裱片时操作不当导致切片弄碎。
解决方法：
切片染完后，裱片时要轻拿轻放，避免切片弄碎。
二、通用解决方法与注意事项
确保实验条件一致
在进行多组实验时，确保实验条件(如温度、时间、试剂浓度等)一致，以减少误差。
遵循说明书操作
在使用染色试剂盒时，务必遵循说明书上的操作步骤和注意事项。
注意试剂保存
试剂应存放在指定条件下(如温度、避光等)，避免试剂变质影响实验结果。
使用合适的实验器材
选择合适的实验器材(如玻璃器皿、切片刀等)，确保实验顺利进行。
注意安全操作
在实验过程中，穿戴实验服和一次性手套，确保个人安全和健康。
