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单细胞铺板在铺细胞时要注意手法

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2022/4/20 13:42:02
       单细胞铺板是细胞实验中最常见又必须掌握的一门技术,看似简单,我们却经常遇到:如细胞居中或者中间稀疏等不均匀分布的现象,导致我们只能扔掉,重新铺板。既耽搁时间又浪费了细胞及培养板等资源。
  单细胞铺板要铺成那种很均匀的单层细胞,手法如下:
  1、细胞板子先加入一定量(一般是总量培养基的1/5)的培养基,放入孵箱中放置10-20min;
  2、在滴入细胞时,细胞板子与通风橱有一定的角度,沿着板壁的孔边缘滴入;
  3、滴入后,呈“8”字方法摇晃5-8次;4、置于水平台上,放置10-20分钟;5、放入孵箱。
  其实单细胞铺板不一定都需要单个单个的那么均匀,比如做免疫荧光时,因为这个样子可以同时检测到单个细胞的形态,另外又可以照一点低倍的用作于统计,所有的细胞都在一个环境中。特别说明一下:这里的多也只是相对于多,细胞也是单层的。
  铺细胞时要注意手法如下:
  1、细胞板子不需要提前用培养基润洗,直接从边上滴入混有细胞的培养基;
  2、放置30s-1min后,前后摇晃5-8次;
  3、放在水平台上静置2-5min;
  4、放入孵箱。
  一般在提取蛋白或者提取RNA的时候有时会这样铺板,因为有些细胞刮刀不好用,没有办法刮到周围的,想要铺中间多,周围少的板子,手法如下:
  1、细胞板子不需要提前润洗,从中间滴入进去后;
  2、把板子朝一个方向顺时针或者逆时针旋转3-5圈;
  3、水平台上静置2-5min;
  4、放入孵箱。

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