单细胞铺板是细胞实验中常见又必须掌握的一门技术，看起来是非常简单的一项操作，但其实却经常会遇到：细胞分布不均匀的情况。要知道把用于实验的细胞铺的均匀且密度适宜，不仅看起来赏心悦目，更是决定了我们实验的稳定性。
单细胞铺板的常见问题解答：
1、细胞计数前后出现较大误差？
考虑细胞沉降导致悬液不匀；悬液体积过大或过小；稀释倍数太高或太低等原因造成。
2、如何克服细胞悬液不均匀的问题？
尽量将细胞吹打为单个，防止抱团，且用移液枪充分吹打，使其均匀悬浮在培养基中。
3、一般加多少细胞悬液合适？
由于加入计数室的量，过少会导致计数室内出现气泡，过多则会使得计数板上的盖玻片不紧贴计数板，使得高度变高，体积变大；计数室体积为9mm3，所以一般加15ul左右。
4、计数时，细胞稀释倍数如何控制？
若是计数室细胞过稀或过密，会造成较大误差，一般适浓度为5～10×105细胞/ml。如一般10cm皿的细胞约300-500万个，一些细胞个体小也能达到1000-2000万，可根据所需细胞数目取出部分作稀释或连续稀释后计数。举例来说可将100ul细胞悬液加入到900ul培养基中，混匀后进行计数，计数所得乘以10即为实际细胞密度。
5、计数的原则有哪些？
计数时对压在外圈边线的细胞遵循“计上不计下，计左不计右”的统计学原则，遇到两个以上的细胞组成的细胞团计为一个细胞
6、对于某些容易聚团的细胞，该怎么办？
对于容易聚团的细胞，尽管当时摇匀了，但是静置30min后，取出后将细胞培养板后，肉眼即可见严重的细胞居中抱团现象，比如乳腺癌细胞MDA-MB-231。
对于这种细胞解决办法：从个人经验来看，若是时间允许的话，可以降低接种密度，可以隔一天细胞多了再进行药物处理或者划线等。
7、如何避免每个孔之间的细胞不均匀？
单细胞铺板速度尽量快点，在加完半边板后，需要再次将培养皿内剩余的细胞悬液充分混匀再继续铺板。
