豚鼠ELISA试剂盒夹心法操作重点关注方面

       如果使用了含有抗原的样品，那就需要一个具有选择性的包被板，因为各种抗原都会结合，而不仅仅是那些感兴趣的。然而，如果像用于抗体检测的豚鼠ELISA试剂盒间接法那样使用纯化抗原，或像豚鼠ELISA试剂盒夹心法那样使用捕获抗体，那么我们已经准备了一个具有选择性的包被板。

       包被板的类型大多数是聚苯乙烯或聚苯乙烯衍生物，其具有不同的结合特性，这取决于目标物质和检测的性质。一些目标物质，包括重度糖基化的蛋白质、碳水化合物、DNA、脂类、短肽和有洗涤剂的蛋白质，是不能很好吸附的。在这些情况下，建议使用经过处理允许共价连接到表面的包被板。

2、孵育

       将试剂加入豚鼠ELISA试剂盒板后，必须进行孵育，以便有时间进行结合或反应。每次孵育的温度和时间将取决于检测步骤和正在进行的操作。通常在样品应用之后，与37℃下孵育1小时。然而，像阻断这样的步骤可以在冰箱中过夜，测定过程中的孵育通常在室温下进行，时间短得多。

3、洗涤

       洗板是在应用在检测每个组成部分之间，直到结果测定的一个重要步骤。溶液从孔中排空后，通常使用磷酸盐缓冲盐水-20（PBST）做为缓冲液清洗孔，以去除任何残留的未结合抗原、抗体或试剂。这可以用多通道移液器手工完成，或使用自动洗板机。不充分的清洗可能会导致高背景信号，而过多的清洗会导致样品信号低。不一致的清洗可能会导致整个板块的不一致，从而导致不可靠的结果。

4、阻断

在用蛋白质包被豚鼠ELISA试剂盒板后，阻断通常是必要的，以防止在接下来方案步骤中测定抗体的任何非特异性结合。