Elabscience Annexin V-FITC / PI细胞凋亡检测试剂盒是用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡试剂盒。那么你知道Annexin V-FITC / PI细胞凋亡检测试剂盒的检测原理与注意事项吗？让我们一起来看看吧！
一、检测原理
Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸 (PS) 有高度亲和力。当细胞发生 凋亡时，膜内侧的磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻到膜表面，而被荧光染料 FITC 标记的 Annexin V 结合，可 通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。
由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，而碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）可与双链 DNA 特异 性结合并产生强烈的荧光，与 Annexin V 搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。 本试剂盒检测喜树碱诱导的 Jurkat 细胞凋亡效果如下图所示：
Jurkat细胞用5 μM 喜树碱（Camptothecin）(左) 或未加药 (右) 处理 4 h，本试剂盒染色后流式检测。Annexin V-FITC单阳细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI双阳细胞为坏死或 晚期凋亡细胞，PI 单阳细胞为裸核细胞。
二、注意事项
1. 检测贴壁细胞时，需收集诱导凋亡后产生的悬浮细胞，并与后续收集的贴壁细胞一起检测。
2. 应尽量避免消化贴壁细胞带来的机械损伤。同时，胰酶的消化液中应尽量不含EDTA，因为EDTA会影响Annexin V与磷脂酰丝氨酸的结合。
3. 如果使用含EDTA 的胰酶，收集细胞后应充分清洗，确保 EDTA 被去除干净。
4. 染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
5. 荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
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