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如何改善组织学切片中的核染色?

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2024/8/15 15:15:40

希望改善组织切片中的细胞核染色?我们可以帮忙!组织学标本通常需要细胞核和组织的其他细胞成分之间的明显区别,以给病理学家提供最佳的诊断外观。苏木精一种碱性染料,将细胞核染色,使其呈现蓝色到紫色。曙红将粉红色调添加到细胞质中,将红色调添加到血细胞中,从而产生对比鲜明的蓝紫色和粉红色阴影,这在标本的细胞结构中是截然不同的。


对于使用组织学标本的常规诊断,使用苏木精和伊红(H&E)染色是目前观察细胞结构细节的方法。因为这种染色显示了如此广泛的细胞质、细胞核和细胞外基质特征,实验室技术人员能够控制嗜碱性染色的外观和强度,以满足病理学家的期望。主要有两种类型:Harris H&E,一种回归技术,和Gill的H&E,一种渐进技术。这篇文章讨论了如何改善每种技术的嗜碱性核染色。

Harris  H&E染色:嗜碱性染色太弱
哈里斯苏木精是一种回归染色技术,因此组织切片首先用苏木精过度染色以产生蓝色细胞核,然后在分化步骤中在弱酸酒精中去除多余的染料。

当苏木精的颜色太弱或标本暴露在苏木精中的时间不够长时,H&E染色中的弱嗜碱性核染色就会发生。以下是我们推荐的解决方案:

  1. 苏木精中的暴露时间太有限:

    为了解决曝光时间,调整载玻片在苏木精染色溶液中的时间长度,直到您看到所需的染色强度。
  2. 苏木精的pH值超出范围:

    为了解决苏木精被稀释超过pH值5-6的理想范围的问题,在染色过程中尽量减少水分带入苏木精溶液。
  3. 水的pH值超出范围:

    染色前检查水的pH值,如果可能,用去离子水或蒸馏水代替自来水。这可以解决水中含有太多氯的问题,氯可以作为漂白剂;减弱苏木精染色。
  4. 弱溶液渗透:

    对于石蜡包埋标本上的H&E染色,如果嗜碱性染色太浅,有可能石蜡没有从组织切片中溶解出来。如果组织切片中有蜡,水基染色液不能适当渗透标本,导致染色弱。将载玻片放回新鲜二甲苯中,去除切片中的石蜡,然后继续对组织标本进行重新染色。
  5. 不良固定或组织处理:

    弱嗜碱性染色的另一个原因是不良的固定或处理。这意味着染色剂不会与组织结合;这是准备纸巾的问题。
  6. 酸性酒精浓度过高:

    如果酸性醇的浓度对于分化步骤来说太强,或者如果样本在酸性醇中花费了太多时间,这种回归染色技术可能导致太多的染料被去除。通过选择较低浓度的酸性酒精溶液(即从1%变为0.5%溶液)或减少样品在溶液中的时间来解决这一问题。

Gill’s H&E染色:嗜碱性染色太弱
吉尔苏木精是一种进行性染色。将染色剂施用于组织切片,而不需要在区分剂(通常为酸性醇)中进行后续步骤,以去除过量的嗜碱性染色剂。

  1. 苏木精中的曝光时间太有限:要解决曝光时间,调整载玻片在苏木精染色中的时间长度,直到您看到所需的染色强度。
  2. 苏木精的pH值超出范围:为了解决苏木精被稀释超过pH值5-6的理想范围的问题,在染色过程中,尽量减少水分带入苏木精溶液。
  3. 水的pH值超出范围:在染色前检查水的pH值,如果可能,用去离子水或蒸馏水代替自来水。这可以解决水中含有太多氯的问题,氯可以作为漂白剂,可以减弱苏木精染色。
  4. 弱溶液渗透:对于石蜡包埋标本上的H&E染色,如果嗜碱性染色太浅,有可能石蜡没有从组织切片中溶解出来。如果组织切片中有蜡,水基染色液不能适当渗透标本,导致染色弱。将载玻片放回新鲜的二甲苯中,去除切片中的石蜡,然后继续对组织标本进行重新染色。
  5. 固定或处理不良:弱嗜碱性染色的另一个原因是固定或处理不良。这意味着染色剂不会与组织结合;这是准备纸巾的问题。


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