离子交换色谱柱是对蛋白、多肽、核苷酸以及抗体等大分子分析非常有效的分析检测和分离纯化手段。离子交换色谱柱的固定相中含有带电基团,这些带电基团通过静电相互作用与样品中带相反电荷的离子结合。如果流动相中存在其他带相反电荷的离子,当样品进入色谱柱后,样品离子会与流动相离子相互竞争固定相表面的电荷位置,并因竞争力的差异使样品组分得到分离。
根据可交换离子所带电荷符号的不同,离子交换色谱柱可分为阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
1.阳离子交换色谱柱:分离介质表面键合有酸性基团,如磺酸基(-SO3H),在溶液中解离出H+,本体所含的负电基团(-SO3-)能吸附结合溶液中的其他阳离子。
2.阴离子交换色谱柱:分离介质表面键合有碱性基团,如季胺基(-NR3OH,其中R为碳氢基团),在溶液中解离出OH-,本体所含的正电基团(-N+R3)能吸附结合溶液中的其他阴离子,从而产生阴离子交换作用。
阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱在离子交换色谱中扮演着重要的角色,它们之间的主要区别体现在以下几个方面:
一、分离机制
阳离子交换色谱柱:
分离介质表面键合有酸性基团,如磺酸基(-SO3H)等。
在溶液中解离出H+,本体所含的负电基团(-SO3-)能吸附结合溶液中的其他阳离子。
阴离子交换色谱柱:
分离介质表面键合有碱性基团,如季胺基(-NR3OH,其中R为碳氢基团)等。
在溶液中解离出OH-,本体所含的正电基团(-N+R3)能吸附结合溶液中的其他阴离子。
二、目标化合物
阳离子交换色谱柱:
主要用于分离和纯化溶液中的阳离子,如重金属离子、氨基酸的阳离子形式等。
适用于带有正电荷或可在一定条件下带正电荷的化合物。
阴离子交换色谱柱:
主要用于分离和纯化溶液中的阴离子,如有机酸、无机酸、核苷酸、核苷酸片段等。
适用于带有负电荷或可在一定条件下带负电荷的化合物。
三、应用场景
阳离子交换色谱柱:
在水处理领域,用于去除水中的重金属离子、放射性物质等污染物。
在化学工业中,用于分离和纯化各种离子型化合物,如氨基酸、核苷酸等。
阴离子交换色谱柱:
用于分离和纯化带有负电荷的生物大分子,如蛋白质、多糖等。
在环境监测中,用于分析水中的阴离子污染物,如硫酸根、硝酸根等。
四、操作条件
阳离子交换色谱柱:
通常需要在较低的pH值条件下操作,以确保阳离子与分离介质表面的酸性基团发生交换。
阴离子交换色谱柱:
通常需要在较高的pH值条件下操作,以确保阴离子与分离介质表面的碱性基团发生交换。