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2024/11/13 16:06:04WinSera血清使用中需要注意的问题有哪些?
(一)被误判为污染的“小黑点”
经过热处理的血清,往往沉淀物会增多,而这些沉淀物在倒置显微镜下观察像是污染物,常常会让研究者误以为血清遭到污染。然而,把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物进一步增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
我们的经验是拿到镜下去观察是否为细菌状或真菌状形态。还有就是做无菌培养,取一点血清在培养皿中,在培养箱里培养几天,观察沉淀物是否有变化。一般情况下,这些沉淀物并不会影响血清的正常使用,Lab里往往用0.22μM的滤膜过滤一下就继续使用了。
(二)解冻血清
解冻血清时,请遵循推荐的分步解冻方法(-20℃→4℃→室温)。实验表明,如果血清解冻温度过高(如-20℃→37℃),很容易产生沉淀。解冻血清时,请随时摇匀,使温度和成分均匀,减少沉淀的发生。请不要长时间将血清放置在37℃环境中,如果放置时间过长,血清会变得混浊,血清中的许多不稳定成分会受到破坏,从而影响血清的质量。血清的热灭活很容易引起沉淀物的增加,我们认为这一步是不必要的。如需对血清进行热灭活,请遵循56℃、30min原则,随时摇匀。如果温度过高、时间过长或摇晃不均匀,沉淀物就会增加。
血清中出现沉淀物的原因有很多,但最常见的是血清中脂蛋白的变性,解冻后血清中还会存在纤维蛋白(形成凝块的蛋白质之一),这也是产生沉淀物的主要原因之一。然而,这些絮状沉淀物虽然并不影响血清本身的质量,但有可能会被误判为污染物。如果要去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装在无菌离心管中,以1200rpm的速度离心,然后将上清液加入培养基中进行过滤。
(三)保存血清