ELISA实验缓冲溶液等试剂的配置方法

       ELISA的实验基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
    大致了解了ELISA的实验原理之后，下面介绍下ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置方法：
（1）　ELISA实验包被缓冲液
（2）　ELISA实验洗涤缓冲液
（3）　ELISA实验稀释液
（4）ELISA实验终止液
（5）ELISA底物缓冲液
（6）ELISA实验TMB（四甲基联苯胺）使用液
（7）　ELISA实验ABTS使用液
（8）ELISA实验封闭液（ELISC）。

试剂

（1）　ELISA实验包被缓冲液（PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液）:
NaHCO3    1.59克
NaHCO3　 2.93克
加蒸馏水至1000ml

（2）　ELISA实验洗涤缓冲液（PH7.4 PBS）：

 KH₂PO₄ 　　　　   　0.2克
Na₂HPO₄·12H₂O　　2.9克
NaCl　　　　　   　　8.0克
KCl　　　　　　　 　0.2克
Tween-20　0.05%　  0.5ml
加蒸馏水至1000ml

（3）　ELISA实验稀释液：

牛血清白蛋白（BSA） 0.1克
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。

（4）　ELISA实验终止液（2M　H₂SO₄）：

蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98%）21.7ml。

（5）　ELISA底物缓冲液（PH5.0磷酸棗柠檬酸）:

0.2M Na₂HPO₄（28.4克/L）              25.7ml
0.1M 柠檬酸（19.2克/L）　　　　　 24.3ml
加蒸馏水50ml。

（6）　ELISA实验TMB（四甲基联苯胺）使用液:

TMB（10mg/5ml无水乙醇）   0.5ml
底物缓冲液（PH5.5）　　　   10ml
0.75%H₂O₂                           32μl

（7）　ELISA实验ABTS使用液:

ABTS　　　　　　　　0.5mg
底物缓冲液（PH5.5）　    1ml
3%H₂O₂                          2μl

（8）ELISA实验封闭液（ELISC）：

牛血清白蛋白（BSA） 5克
加洗涤缓冲液至100ml。

需要特别注意的是封闭液中含有脱脂奶粉，不适合长期保存。

ELISA实验过程中为了保证实验结果的准确性，操作中加入的缓冲液和各组分一定要，将洗涤液加入酶标板中的时候防止加入的试剂混入另外一个酶标孔，严防交叉污染。