革兰氏染色及芽孢染色

一、实验原理

革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇（或丙酮）脱色，zui后用复染剂（如番红）复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色（红色），该菌属于革兰氏阴性菌。革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征，为保证染色结果的正确性，采用规范的染色方法是十分必要的。 芽孢染色法的基本原理，用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。

二、试剂与器材

1、材料：枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物，大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物

2、试剂 革兰氏染色液（结晶紫液、碘液、95％乙醇、番红液）。5％孔雀绿水溶液

3、实验器材 小试管、滴管、烧杯、试管架、滤纸、木夹子、载玻片、盖玻片、凹载玻片、无菌水、显微镜等、接种环、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、擦镜纸、生理盐水等。

三、实验内容

1、革兰氏染色法 制片→初染→媒染→脱色→复染→镜检。

2、Schaefer-Fulton氏染色法 制片→染色→水洗→复染→水洗→镜检。

四、关键步骤及注意事项

1、涂片时，生理盐水及取菌不宜过多，涂片应尽可能均匀，

2、乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，严格掌握脱色时间。