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革兰氏染色及芽孢染色

上海源叶生物科技有限公司

2009/9/3 0:39:37

一、实验原理

革兰氏染色法的基本步骤是:先用初染剂结晶紫进行染色,再用碘液媒染,然后用乙醇(或丙酮)脱色,zui后用复染剂(如番红)复染。经此方法染色后,细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌;如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染剂的颜色(红色),该菌属于革兰氏阴性菌。革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征,为保证染色结果的正确性,采用规范的染色方法是十分必要的。 芽孢染色法的基本原理,用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红,在加热条件下染色,使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内,进入菌体的染料经水洗后被脱色,而芽孢一经着色难以被水洗脱,当用对比度大的复染剂染色后,芽孢仍保留初染剂的颜色,而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色,使芽孢和菌体更易于区分。

二、试剂与器材

1、材料:枯草芽孢杆菌12~18h营养琼脂斜面培养物,大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物

2、试剂 革兰氏染色液(结晶紫液、碘液、95%乙醇、番红液)。5%孔雀绿水溶液

3、实验器材 小试管、滴管、烧杯、试管架、滤纸、木夹子、载玻片、盖玻片、凹载玻片、无菌水、显微镜等、接种环、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)、擦镜纸、生理盐水等。

三、实验内容

1、革兰氏染色法 制片→初染→媒染→脱色→复染→镜检。

2、Schaefer-Fulton氏染色法 制片→染色→水洗→复染→水洗→镜检。

四、关键步骤及注意事项

1、涂片时,生理盐水及取菌不宜过多,涂片应尽可能均匀,

2、乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节,严格掌握脱色时间。

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