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盐析法抗体纯化实验操作

上海誉贸实业有限公司

2014/2/11 10:21:15


盐析法抗体纯化实验操作
取1X ml血清加1X ml生理盐水,于搅拌下逐滴加入2X ml饱和硫酸铵,硫酸铵的终饱和度为50%。
↓4℃,3h以上,使其充分沉淀

离心(3000rpm),20min,充上清,以x ml生理盐水溶解沉淀,再逐滴加饱和硫酸铵x/2ml。
↓置4℃3h以上,[此时,(nh4)2so4的饱和度为33%]

重复上述第二步过程1~2次。末次离心后所得沉淀物为γ-球蛋白,以0.02% mol/l pH7.4pbs溶解至x ml装入透析袋。

↓对PBS充分透析、换液3次,至萘氏试剂测透析外液无黄色,即无NH4+为止。
取透析袋内样品少许作适当倍数稀释后,以752型紫外分光光度计测定蛋白含量。

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