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荧光素标记整合素α4β7抗体IgG

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荧光素标记整合素α4β7抗体IgG

DyLight594是DyLight系列荧光染料家族成员之一,zui大吸收波长593nm,zui大发射波长618nm。DyLight是是一系列非常明亮并且稳定的荧光基团,是一种新型荧光染料。具有高荧光强度,灵敏性出色,对抗光漂白的能力强,在大多数条件下都能获得荧光图片,PH值稳定性好,在很宽的PH值范围内都能获得很好的荧光信号,适合拍照,与仪器的兼容性好,发射波长与普通荧光设备的输出波长匹配。因此可用于大部分荧光显微镜以及远红外成像系统。
TRITC(Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate,四甲基异硫氰酸罗丹明)为罗丹明的一种衍生物,呈紫红色粉末,较稳定,zui大吸收光波长550nm,zui大发射光波长620nm,呈现橙红色荧光。TRITC能与细胞内蛋白质结合,比FITC稳定性好,对pH值变化不敏感,荧光强度受自发荧光干扰小,与FITC的翠绿色荧光对比鲜明,可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢,也可用于单独标记染色。罗丹明的衍生物还包括Rhodamine Red-X(RRX), Texas Red(TR)等。

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荧光素标记整合素α4β7抗体IgG

注意事项
1)对荧光标记的抗体的稀释,要保证抗体的蛋白有一定的浓度,一般稀释度不应超过1:20,抗体浓度过低,会导致产生的荧光过弱,影响结果的观察。
2)染色的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化,染色时间可以从10 min到数小时,一般30 min已足够。染色温度多采用室温(25℃左右),高于37℃可加强染色效果,但对不耐热的抗原(如流行性乙型脑炎病毒)可采用0-2℃的低温,延长染色时间。低温染色隔夜较37℃30 min效果好的多。
3)为了保证荧光染色的正确性,*试验时需设置下述对照,以排除某些非特异性荧光染色的干扰。
① 标本自发荧光对照:标本加1-2滴0.01mol/L,pH7.4的PBS。
② 特异性对照(抑制试验):标本加未标记的特异性抗体,再加荧光标记的特异性抗体。
③ 阳性对照:已知的阳性标本加荧光标记的特异性抗体。
如果标本自发荧光对照和特异性对照呈无荧光或弱荧光,阳性对照和待检标本呈强荧光,则为特异性阳性染色。
4)一般标本在高压汞灯下照射超过3min,就有荧光减弱现象,经荧光染色的标本在当天观察,随着时间的延长,荧光强度会逐渐下降。

 

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