血清免疫球蛋白的分离制备具体操作

血清免疫球蛋白的分离制备操作:

（1）在1支离心管中加入5ml血清和5ml 0.01mol/L，PH7.0 磷酸盐缓冲液，混匀。用皮头滴管吸取饱和硫酸铵溶液，边滴加边搅拌于血浆溶液中，使溶液的zui终饱和度为20%（应加入饱和硫酸铵溶液多少毫升？），用滴管边加边搅拌，是为防止饱和硫酸铵1次性加入或搅拌不均匀造成局部过饱和的现象，使盐析达不到预期的饱和度，得不到目的蛋白质。搅拌时不要过急以免产生过多泡沫，致使蛋白质变性。加完后应在4℃放置15min，使之充分盐析。然后以3000r/min离心10min。弃去沉淀（沉淀为纤维蛋白原），在上清液中为清蛋白、球蛋白。

（2）量取上清液的体积，置于另一离心管中，用滴管继续在上清液中滴加饱和硫酸铵溶液，使溶液的饱和度达到50%（应加饱和硫酸铵溶液多少毫升？）。加完后在4℃放15min，以3000r/min离心10min，清蛋白在上清液中，沉淀为球蛋白。弃去上清液，留下沉淀部分。

（3）将所得的沉淀再溶于5ml0.01mol/L，PH7.0磷酸盐缓冲液中。滴加饱和硫酸铵溶液，使溶液的饱和度达35%（应加入饱和硫酸铵溶液多少毫升？）。加完后4℃放置20min，以3000r/min离心15min，a，b球蛋白在上清液中，沉淀为IgG。弃去上清液，即获得粗制的IgG沉淀。

为了进一步化，操作（3）可得1~2次。将获得的粗IgG沉淀溶解于2ml0.0175mol/L，PH6.7磷酸盐缓冲液中备用。