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2015/5/20 9:17:42
微量DNA产物纯化试剂盒说明书
MicroDNA Purification Kit
目录号: YJ0520
保 存: 室温
组分说明
Cat.No. YJ0520
KitSize 50
BufferPB 30ml
BufferPS 15ml
BufferPW(concentrate) 10ml
BufferEB 10ml
SpinColumnDS 50
CollectionTube(2ml) 50
产品简介
本试剂盒是专门针对微量PCR产物及一些酶反应液(酶切,连接,探针标记等)而设计的,利用硅基质膜技术,以非常小的终洗脱体积(可少至10μl),从反应液中快速纯化50bp-50kb的DNA片段,纯化过程中可去除引物、寡核苷酸、酶等杂质,可获得高纯度,高浓度,完整性好的DNA,回收率高达90%。本试剂盒回收的DNA可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。
注意事项
1. 本试剂盒适用于无选择性地回收溶液中所有的DNA片段,如需选择性回收特定片段,同时去除其他不同大小片段,请选择我公司的胶回收试剂盒(YJ0524,YJ2302,YJ0518或YJ0526)。
2. *次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 BufferPW 中加入无水乙醇。
3. 使用前请检查 BufferPB 是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在 37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。
4. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。
5. 所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心。
自备:无水乙醇,离心管
操作步骤
1. 估计PCR反应液或酶切反应液的体积,加入5倍体积的Buffer PB,充分混匀(如PCR反应体系为50μl,则加入250μlBufferPB,无需去除石蜡油或矿物油)。
注意:在加入BufferPB后检测溶液的pH值,若pH值大于7.5,可向其中加入10-30 μl 的3M醋酸钠(pH5.0),从而将pH值调到5-7。
2. 柱平衡:向已装入收集管(CollectionTube)中的吸附柱(SpinColumnDS)中加入200 μl Buffer PS,12,000rpm(~13,400×g)离心2分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
3. 将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:吸附柱容积为700μl,若样品体积大于700μl可分批加入。
4. 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:如果纯化的DNA是用于盐敏感的实验,例如平末端连接实验或直接测序,建议加入BufferPW后静置2-5分钟再离心。
5. 12,000rpm离心2分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以*晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。为确保下游实验不受残留乙醇的影响,建议将吸附柱开盖,置于室温放置数分钟,以*晾干吸附材料中残余的乙醇。
6. 将吸附柱置于一个新离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加10-30 μl Buffer EB,室温放置2分钟。12,000rpm离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意:1)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)。
2)为了提高DNA的回收量,可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中,重复步骤6。
3)洗脱体积不应小于10μl,体积过少影响回收效率。
4)如果使用TE洗脱,需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。
5)回收大于10kb的DNA片段时,BufferEB应在50℃水浴中预热,适当延长吸附和洗脱时间,可增加回收效率。