微量DNA产物纯化试剂盒说明书
MicroDNA Purification Kit
目录号： YJ0520
保 存： 室温
组分说明
Cat.No. YJ0520
KitSize 50
BufferPB 30ml
BufferPS 15ml
BufferPW（concentrate） 10ml
BufferEB 10ml
SpinColumnDS 50
CollectionTube（2ml） 50
产品简介
本试剂盒是专门针对微量PCR产物及一些酶反应液（酶切，连接，探针标记等）而设计的，利用硅基质膜技术，以非常小的终洗脱体积（可少至10μl）,从反应液中快速纯化50bp-50kb的DNA片段，纯化过程中可去除引物、寡核苷酸、酶等杂质，可获得高纯度，高浓度，完整性好的DNA，回收率高达90%。本试剂盒回收的DNA可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。
注意事项
1. 本试剂盒适用于无选择性地回收溶液中所有的DNA片段，如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择我公司的胶回收试剂盒（YJ0524，YJ2302，YJ0518或YJ0526）。
2. *次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 BufferPW 中加入无水乙醇。
3. 使用前请检查 BufferPB 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在 37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
4. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关。
5. 所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心。
自备：无水乙醇，离心管
操作步骤
1. 估计PCR反应液或酶切反应液的体积，加入5倍体积的Buffer PB，充分混匀（如PCR反应体系为50μl，则加入250μlBufferPB，无需去除石蜡油或矿物油）。
注意：在加入BufferPB后检测溶液的pH值，若pH值大于7.5，可向其中加入10-30 μl 的3M醋酸钠（pH5.0），从而将pH值调到5-7。
2. 柱平衡：向已装入收集管（CollectionTube）中的吸附柱（SpinColumnDS）中加入200 μl Buffer PS，12,000rpm（~13,400×g）离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
3. 将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：吸附柱容积为700μl，若样品体积大于700μl可分批加入。
4. 向吸附柱中加入650 μl Buffer PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果纯化的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议加入BufferPW后静置2-5分钟再离心。
5. 12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以*晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残余的乙醇。
6. 将吸附柱置于一个新离心管（自备）中，向吸附膜中间位置悬空滴加10-30 μl Buffer EB，室温放置2分钟。12,000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：1）洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围）。
2）为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，重复步骤6。
3）洗脱体积不应小于10μl，体积过少影响回收效率。
4）如果使用TE洗脱，需要考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。
5）回收大于10kb的DNA片段时，BufferEB应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。
