蛋白酶K的应用与保存

蛋白酶K的应用与保存

蛋白酶K是一种用途广泛的非特异性的丝氨酸蛋白酶。在pH 4到pH 12的条件下均有活性，在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。罗氏蛋白酶K常用于提取mRNA、基因组DNA，或用于从各种细胞中提纯DNA和RNA时消化杂蛋白。还可用于糖蛋白的修饰，以及蛋白质结构研究等方面

蛋白酶K的应用比较广泛，它可以消化包围靶DNA蛋白，因此使用罗氏蛋白酶K能够增加探针与靶核酸结合的机会增强杂交信号，但在使用罗氏蛋白酶K时要注意使用的浓度，过高或者过低都会破坏细胞的结构、核消失等影响试验结果。

蛋白酶K的作用：

蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理，它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用，以增加探针与靶核酸结合的机会，提高杂交信号。但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时，都会对细胞的结构有一定的破坏，导致组织切片的脱落，细胞核的消失，从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用，解决上述出现的问题，并能达到理想的染色效果。

蛋白酶K的配制和保存

推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。

蛋白酶k配制标准：20mg/ml蛋白酶K配制标准(proteinase K)：将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K*溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

蛋白酶K的保存：保存在-20℃冰箱里，避免反复冻融，有效保证12月。孵育温度为55至65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟至48小时;理想孵育时间为2小时。
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