二甲基黄属于亲脂性偶氮染料，用作显色剂可测定硒、钌、碘、砷、铜和溴酸根等。工业上常用于油漆、鞋油和纺织品等的染色。因具神经及生殖毒性，长期摄取二甲基黄会增加罹患肝癌、肺癌、膀胱癌风险，癌症研究署（IARC）已将其列为2B等级的致癌物，禁止作为食品添加剂使用。但是，我国中国台湾地区不断报道出在豆干中检出了二甲基黄。
目前二甲基黄的测定方法主要有气相色谱串联质谱法，固相萃取-超液相串联质谱。我们采用的是固相萃取-超液相串联质谱。
迪马科技开发的《食品中二甲基黄的测定》采用固相萃取-超液相串联质谱测定食品中的二甲基黄，以乙酸乙酯和水为提取液，采用ProElut DMY固相萃取柱净化样品，通过UPLC检测；本方案前处理步骤简便、操作简单、净化效果好，重现性好，回收率高。
以下为详细解决方案，敬请参考！
1、适用范围
适用于豆干、糕点和饼干中二甲基黄的检测，方法检出限是0.03 µg/kg，定量限是0.1 µg/kg。
2、提取
取1.0 g样品（易乳化的样品需加1.0 g氯化钠），加入2 mL水，涡旋混匀，加入5 mL乙酸乙酯，振荡5 min，6000 rpm下离心2 min，精密量取2.5 mL上清液待净化。
3、净化——ProElut DMY 3 mL（Cat.# 65914）
a活 化： | 3 mL乙酸乙酯活化； |
b上 样： c淋 洗： | 加入待净化液，弃去流出液； 加入3 mL乙酸乙酯，弃去流出液(推干小柱)； |
d洗 脱： | 加入4 mL10%氨水甲醇，收集流出液； |
e重新溶解： | 将流出液在50 ℃下氮吹至干，用流动相定容至1 mL，过0.22 µm微孔滤膜，供LC-MS分析。 |
4、色谱条件
4.1 UPLC 条件：
色谱柱：Endeavosil C18，100 × 2.1 mm，1.8 μm (Cat#：87003)
流 速：0.2 mL/min
进样量：5 μL
柱 温：35 ℃
流动相： A：0.1%甲酸水 B：乙腈 A：B=20：80
4.2 质谱条件：
电离模式：ESI 扫描方式：正离子扫描
检测方式：多反应监测 电喷雾电压：5500 V
雾化气压力：50 psi 辅助气压力：50 psi
气帘气压力：20 psi 离子源温度：500 ℃
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
目标物 | 定性离子对 | 定量离子对 | 碰撞气能量/eV | 去簇电压/ V |
（m/z） | （m/z） | |||
(母离子/子离子) | (母离子/子离子) | |||
二甲基黄 | 226.3/77.2 | 226.2/77.2 | 30 | 74 |
226.3/134.1 | 30 |
5、添加回收结果
食品中二甲基黄的LC-MS检测添加回收结果
基质 | 添加水平(µg/kg) | 回收率(%) |
豆干 | 1.0 | 100.08 |
糕点 | 1.0 | 90.75 |
饼干 | 1.0 | 108.63 |
二甲基黄（0.5 µg/L）多反应监测色谱图
添加水平为1.0 µg/kg豆干中二甲基黄检测的多反应监测色谱图
添加水平为1.0 µg/kg糕点中二甲基黄检测的多反应监测色谱图
添加水平为1.0 µg/kg饼干中二甲基黄检测的多反应监测色谱图
食品中二甲基黄的测定相关产品信息：
货号 | 名称 | 规格 |
样品前处理 | ||
65914 | ProElut DMY | 3 mL, 50/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取装置 | 12位 |
4803 | 1,3,6mL柱管通用连接器 | 15/pk |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正压两用泵，无油 | 1/pk |
99013 | 抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞) | 1/pk |
30039 | FitMax针头式过滤器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
30040 | FitMax针头式过滤器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
标准品 | ||
12-N-12774-100MG | 二甲基黄[60-11-7] | 100 mg |
色谱柱及保护柱 | ||
87003 | 超液相色谱柱 Endeavosil C18 | 100 × 2.1 mm，1.8 μm |
HPLC溶剂?缓冲盐?离子对试剂 | ||
50144 | 甲酸 HPLC级 | 50 mL |
50101 | 乙腈 HPLC级 | 4 L |
50102 | 甲醇 HPLC级 | 4 L |
50104 | 乙酸乙酯 HPLC级 | 4 L |
通用色谱产品 | ||
52401B | 瓶架/蓝色（现货） | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色（现货） | 50孔 |
1034 | 样品瓶（棕色/螺纹） | 2 mL, 100/pk |
1035 | 样品瓶盖/含垫（已经组装） | 100/pk |
H80465 | HPLC 进样针 | 25 μL |
红色产品货号#30039、#30040、#1034、#1035*
