嘌呤霉素的作用

嘌呤霉素的作用

    嘌呤霉素(puromycin;PM ) 是一种抗生素，广泛用作蛋白质合成的抑制剂。其结构与氨酰tRNA 3′端上的AMP结构相似，肽酰转移酶能促使氨基酸与嘌呤霉素结合形成肽酰嘌呤霉素，从核糖体上脱落，从而使蛋白质合成反应中断。
嘌呤霉素的作用：
    嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，嘌呤霉素Puromycin通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。嘌呤霉素Puromycin某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。嘌呤霉素Puromycin作为氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。但是嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素Puromycin抗性基因：
    对嘌呤霉素的抗性取决于编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶(PAC)的?Pac基因，遗传工程研究使用的Pac基因分离自嘌呤霉素产生菌Streptomycesalboniger。
嘌呤霉素Puromycin普遍应用：
1）嘌呤霉素作用于筛选和维持培养含Pac基因的哺乳动物稳定转染细胞。嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。
2）在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
化学特性：化学名称：
3(a-Amino-p-methoxyhydro?cinnamamido)-3–deoxy-N,N–dimethyladenosine·2HClCAS
No.：58-58.2，
分子式：C22H29N7O5.2HCl，
分子量：544.43g/mo
纯度：＞98%（HPLC）,易溶于水5-50mg/mL，-20度保存。
    嘌呤霉素Puromycin应用浓度：哺乳动物细胞的推荐使用浓度为1-10?μg/mL，佳浓度需要杀灭曲线来确定。LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
    嘌呤霉素可由白色链球菌（Streptomyces.alboniger）发酵制得的抗生素。熔点175.5～177.0℃。旋光度-11 （乙醇）。在酸性溶液中分解成为6-二甲胺嘌呤，O-甲基-L-酷氨酸及3-氨基-3-去氧核糖。结构与氨基酰tRNA分子中腺苷相连结的氨基酸末端基因相似，因而它可作氨基酰tRNA的类似物，从而取代一些氨基酰tRNA进入核糖体的A位与正在延伸的多肽链结合，当延长中的肽转入此异常A位时，容易脱落，以肽基嘌呤霉素的形式从核糖核蛋白体上早期解离,终止肽链合成,从而抑制了蛋白质的合成。由于嘌呤霉素对原核和真核生物的翻译过程均有干扰作用，故难于用做抗菌药物，嘌呤霉素作用于研究蛋白质合成的生物化学工具。有人试用于肿瘤治疗。