Caspase 3 活性检测试剂盒/Caspase 3 Activity Assay Kit   BB-4106

使用方法：

• 裂解缓冲液和检测缓冲液配制

根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1ml缓冲液中加入10ul DTT。

• 样品处理
• 细胞样品

1. 收集2-5×10⁶个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入100μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上15分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
5. 在4℃，500×g条件下离心5分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。

 组织样品

1. 取适量组织样本剪碎，按照50mg/100μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置15分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。

1. 在4℃，500×g条件下离心5分钟。
2. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。

• 对上述处理过的上清用Bradford法进行蛋白定量。

• Caspase 3活性检测
  1. 取10ul大约含20-50ug蛋白的裂解上清，加入90ul检测缓冲液。
  2. 再加入10ul Ac-DEVD-pNA （使用前请混匀），在37℃下避光反应1-2小时，有黄色颜色产生即可进行检测，如果颜色变化不明显，时间可以延长，甚至孵育过一晚。部分样品中激活的caspase-3水平较低，颜色变化不明显，直接上机检测，与对照组样品产品变化即可。
  3. 测定A405nm或A400nm。

根据凋亡诱导的细胞的吸光值与空白对照细胞的吸光值的比值计算相对的Caspase 3活性程度。

Caspase 3 活性检测试剂盒/Caspase 3 Activity Assay Kit   BB-4106

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