细胞周期常见问题分析

Q：在测定细胞周期的时候,由于固定、消化等处理后会出现很多细胞碎片，影响测量结果，无法找到G1期细胞群。另外，在测定亚二倍体时，不是那么很清楚的显示出来。

A：方法改进：

在测定细胞周期的时候（以BD公司的Calibur为例），除了设置好获取数据的模版外，另外设置以FL3为横坐标的直方图，测量模式为对数（log），调整放大倍数，使二倍体峰出现在横坐标10*3的位置，就很容易的找到了二倍体峰和细胞周期个时相细胞的分布情况。根据它再调节FL2（线性模式下）的放大 倍数，使二倍体峰在10*2的位置即可。

Q：我要做流式分析细胞周期，我大概收集了10的6次方细胞，但细胞在乙醇固定之后，还看到有细胞沉淀的，但PBS洗涤两次之后，就基本没什么细胞沉淀了，上机发现就发现不了细胞了。这是怎么回事啊？怎么解决这个问题啊？

A：很可能是洗细胞的过程中丢失了，解决办法有： 

（1）尽量采用尖底的离心管和水平离心机 

（2）离心后尽量用吸管吸取上清，不要倾倒；吸上清时残留1mm左右的水膜，不要吸完。 

（3）离心的转速或时间可稍微增加一点儿 

（4）每次加试剂时，吸头不要接触液面；混匀时不要用吸头吹打，以免吸头挂壁带走部分细胞。