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荧光定量PCR检测服务-SYBR染料法
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上海基屹生物科技有限公司成立于2013年6月，位于上海周浦时代医创园，是一家锐意进取的生物高科技创新型企业，集生物技术研发、支持和服务为一体，为生命科学领域的科研人员，临床医学人员等提供TA克隆,亚克隆,质粒构建，RNAi干扰,miRNA定量,荧光定量PCR，SNP分型，STR检测，基因编辑，基因敲除，动物造模等相关的技术服务的同时，我们也在不断摸索，积极研发自己的试剂产品，如分子，蛋白，细胞等方面的常规试剂，提供给我们的敬爱的科研工作者，并且我们与国内外具有竞争力的耗材仪器厂家达成协议，保持长期稳定的合作，秉承在技术方面提供支持的同时，也同样提供国内外优质的试剂，耗材，常规仪器、分析仪器，满足客户的不同需求，一站式的服务是我们经营的理念，我们将不断提高技术人员的技术水平，销售人员的业务能力，圆满完成技术服务项目及产品销售，同时，并为广大的科研工作者提供可靠的产品和全面的技术服务，用我们过硬的技术，优质的产品，完善的服务获得每个客户信任，支持和厚爱，最后感谢各位的支持和帮助。
公司技术平台特色：
分子生物学技术服务项目包括：
TA克隆，亚克隆；质粒构建，荧光定量PCR检测；RNAi干扰；miRNA检测；SNP分型；STR检测等；文库构建；高通量测序。
蛋白组学技术服务项目包括：
蛋白抽提，蛋白纯化，WB，Elisa,免疫组化，质谱鉴定，N端测序等。
细胞生物学技术服务项目包括：
细胞培养，细胞转染；慢病毒包装；腺病毒包装； 基因编辑；基因敲除；动物造模等；
代理销售产品：
仪器类：移液器：Eppendorf移液器、吉尔森移液器，锐宁移液器，大龙移液器，宝予德移液器
离心机：Eppendorf离心机，卢湘仪离心机，蜀科离心机，安亭离心机，ABSON迷你离心机
PCR仪：赛洛捷克PCR仪，ABI普通PCR仪、ABI 7500/ 7500Fast实时定量PCR仪
Bio-rad产品：凝胶成像系统、Bio-rad电源，Bio-rad电泳槽、Bio-rad转移槽，玻璃板
箱体产品：一恒培养箱、一恒干燥箱，一恒恒温摇床，安泰超净台，中科美菱超低温冰箱
试剂类：
gegenetech医药中间体全线产品：总代理
Abbkine全线产品：上海区域一级代理
MCE小分子抑制剂，激动剂全线产品：上海区域一级代理
Bioteke核酸提取及分子试剂全线产品：上海区域一级代理
Thermo scientific部分产品：上海区域特约经销商
NEB全线产品：上海区域特约经销商
耗材类：
Axygen全线产品：全国特约经销商
Corning全线产品：全国特约经销商
BD 耗材产品：上海区域特约经销商
NEST耗材产品：上海区域特约经销商
详细信息
实时荧光定量PCR（Real Time Quantitative PCR）
在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。相对定量用于测定一个测试样本中目标核酸序列与校正样本中同一序列表达的相对变化。校正样本可以是一个未经处理的对照或者是在一个时辰研究中处于零时的样本。
相对定量应用（Relative Quantification，RQ）
非特异性荧光标记：
1、SYBR Green
SYBR Green特性：
（1）只有和双链DNA结合后才发荧光。
（2）变性时，DNA双链分开，无荧光。
（3）在延伸结束阶段采集荧光信号。
（4）SYBR Green也能和非特异性的双链DNA结合发光，所以必须在反应结束时做熔解曲线分析。
相对定量通过内标定量：
内标（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在细胞中的表达量或在基因组中的拷贝数恒定，受环境因素影响小，内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
相对定量分析方法：
2-ΔΔCt
前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏差在5％以内
1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
3、计算表达水平比率：
2 –ΔΔCT=表达量的比值
服务流程：
| 步骤 | 客 户 提 供 | 服 务 内 容 | 基 屹 提 供 |
|---|---|---|---|
| 1 | 新鲜的且尽量多的材料；已知的全长基因序列；尽可能详细的背景资料：DNA/ RNA来源、丰度等。 | DNA/RNA提取，根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针。 | |
| 2 | 纯化好的DNA/RNA（大于5 ug/样品）；已知的全长基因序列；尽可能详细的背景资料：DNA/ RNA来源、丰度等。 | 根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针。 | |
| 3 | 以DNA为模板，对目的基因进行荧光定量PCR检测分析 | 提供完整的定量分析结果、实验荧光定量扩增曲线及详细的实验步骤。 |
注意：客户可根据所能提供的起始材料不同，选择从步骤1或2启动项目。
