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上海荧光定量PCR检测
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生产厂家上海基屹生物科技有限公司成立于2013年6月,位于上海周浦时代医创园,是一家锐意进取的生物高科技创新型企业,集生物技术研发、支持和服务为一体,为生命科学领域的科研人员,临床医学人员等提供TA克隆,亚克隆,质粒构建,RNAi干扰,miRNA定量,荧光定量PCR,SNP分型,STR检测,基因编辑,基因敲除,动物造模等相关的技术服务的同时,我们也在不断摸索,积极研发自己的试剂产品,如分子,蛋白,细胞等方面的常规试剂,提供给我们的敬爱的科研工作者,并且我们与国内外具有竞争力的耗材仪器厂家达成协议,保持长期稳定的合作,秉承在技术方面提供支持的同时,也同样提供国内外优质的试剂,耗材,常规仪器、分析仪器,满足客户的不同需求,一站式的服务是我们经营的理念,我们将不断提高技术人员的技术水平,销售人员的业务能力,圆满完成技术服务项目及产品销售,同时,并为广大的科研工作者提供可靠的产品和全面的技术服务,用我们过硬的技术,优质的产品,完善的服务获得每个客户信任,支持和厚爱,最后感谢各位的支持和帮助。
公司技术平台特色:
分子生物学技术服务项目包括:
TA克隆,亚克隆;质粒构建,荧光定量PCR检测;RNAi干扰;miRNA检测;SNP分型;STR检测等;文库构建;高通量测序。
蛋白组学技术服务项目包括:
蛋白抽提,蛋白纯化,WB,Elisa,免疫组化,质谱鉴定,N端测序等。
细胞生物学技术服务项目包括:
细胞培养,细胞转染;慢病毒包装;腺病毒包装; 基因编辑;基因敲除;动物造模等;
代理销售产品:
仪器类:移液器:Eppendorf移液器、吉尔森移液器,锐宁移液器,大龙移液器,宝予德移液器
离心机:Eppendorf离心机,卢湘仪离心机,蜀科离心机,安亭离心机,ABSON迷你离心机
PCR仪:赛洛捷克PCR仪,ABI普通PCR仪、ABI 7500/ 7500Fast实时定量PCR仪
Bio-rad产品:凝胶成像系统、Bio-rad电源,Bio-rad电泳槽、Bio-rad转移槽,玻璃板
箱体产品:一恒培养箱、一恒干燥箱,一恒恒温摇床,安泰超净台,中科美菱超低温冰箱
试剂类:
gegenetech医药中间体全线产品:总代理
Abbkine全线产品:上海区域一级代理
MCE小分子抑制剂,激动剂全线产品:上海区域一级代理
Bioteke核酸提取及分子试剂全线产品:上海区域一级代理
Thermo scientific部分产品:上海区域特约经销商
NEB全线产品:上海区域特约经销商
耗材类:
Axygen全线产品:全国特约经销商
Corning全线产品:全国特约经销商
BD 耗材产品:上海区域特约经销商
NEST耗材产品:上海区域特约经销商
上海荧光定量PCR检测的方法:
荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料。而荧光定量 PCR 的方法相应的可分为特异类和非特异类两类,特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物;而非特异性检测方法是在在PCR反应体系中,加入过量荧光染料,荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射出荧光信号。前者由于增加了探针的识别步骤,特异性更高,但后者则简便易行。
上海荧光定量PCR检测zui常用的方法是DNA结合染料SYBR GreenⅠ的非特异性方法和Taqman水解探针的特异性方法,在这里主要介绍这2种方法,其它方法请参考其它荧光定量PCR资料。
1、非特异性SYBR Green I染料法
SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料(结合示意图),在游离状态下,SYBR Green I发出微弱的荧光,但一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强(作用机理图)。因此,SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关,可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。
2、特异性Taqman水解探针法
Taqman荧光定量技术是以Taqman荧光探针为基础,Taqman荧光探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个荧光发射基团和一个荧光淬灭基团。探针完整时,发射基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;
PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使荧光发射基团和荧光淬灭基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。从而实现定量(如下图)。常用的荧光基团是FAM, TET, VIC, HEX。