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荧光定量PCR检测技术服务-Taqman探针法
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上海基屹生物科技有限公司成立于2013年6月，位于上海周浦时代医创园，是一家锐意进取的生物高科技创新型企业，集生物技术研发、支持和服务为一体，为生命科学领域的科研人员，临床医学人员等提供TA克隆,亚克隆,质粒构建，RNAi干扰,miRNA定量,荧光定量PCR，SNP分型，STR检测，基因编辑，基因敲除，动物造模等相关的技术服务的同时，我们也在不断摸索，积极研发自己的试剂产品，如分子，蛋白，细胞等方面的常规试剂，提供给我们的敬爱的科研工作者，并且我们与国内外具有竞争力的耗材仪器厂家达成协议，保持长期稳定的合作，秉承在技术方面提供支持的同时，也同样提供国内外优质的试剂，耗材，常规仪器、分析仪器，满足客户的不同需求，一站式的服务是我们经营的理念，我们将不断提高技术人员的技术水平，销售人员的业务能力，圆满完成技术服务项目及产品销售，同时，并为广大的科研工作者提供可靠的产品和全面的技术服务，用我们过硬的技术，优质的产品，完善的服务获得每个客户信任，支持和厚爱，最后感谢各位的支持和帮助。
公司技术平台特色：
分子生物学技术服务项目包括：
TA克隆，亚克隆；质粒构建，荧光定量PCR检测；RNAi干扰；miRNA检测；SNP分型；STR检测等；文库构建；高通量测序。
蛋白组学技术服务项目包括：
蛋白抽提，蛋白纯化，WB，Elisa,免疫组化，质谱鉴定，N端测序等。
细胞生物学技术服务项目包括：
细胞培养，细胞转染；慢病毒包装；腺病毒包装； 基因编辑；基因敲除；动物造模等；
代理销售产品：
仪器类：移液器：Eppendorf移液器、吉尔森移液器，锐宁移液器，大龙移液器，宝予德移液器
离心机：Eppendorf离心机，卢湘仪离心机，蜀科离心机，安亭离心机，ABSON迷你离心机
PCR仪：赛洛捷克PCR仪，ABI普通PCR仪、ABI 7500/ 7500Fast实时定量PCR仪
Bio-rad产品：凝胶成像系统、Bio-rad电源，Bio-rad电泳槽、Bio-rad转移槽，玻璃板
箱体产品：一恒培养箱、一恒干燥箱，一恒恒温摇床，安泰超净台，中科美菱超低温冰箱
试剂类：
gegenetech医药中间体全线产品：总代理
Abbkine全线产品：上海区域一级代理
MCE小分子抑制剂，激动剂全线产品：上海区域一级代理
Bioteke核酸提取及分子试剂全线产品：上海区域一级代理
Thermo scientific部分产品：上海区域特约经销商
NEB全线产品：上海区域特约经销商
耗材类：
Axygen全线产品：全国特约经销商
Corning全线产品：全国特约经销商
BD 耗材产品：上海区域特约经销商
NEST耗材产品：上海区域特约经销商
详细信息
实时荧光定量PCR技术（Real Time Quantitative PCR）
在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
相对定量应用（Relative Quantification，RQ）
特异性荧光标记：
TaqMan法
TaqMan探针的特性：
（1）5′端标记有报告基团（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端标记有荧光淬灭基团 （Quencher, Q）
（3）探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ，无荧光， R与Q分开，发荧光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针
相对定量通过内标定量：
内标（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在细胞中的表达量或在基因组中的拷贝数恒定，受环境因素影响小，内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
相对定量分析方法 ：
2-ΔΔCt
前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏差在5％以内
1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
3、计算表达水平比率：
2 –ΔΔCT=表达量的比值
服务流程：
步骤 | 客 户 提 供 | 服 务 内 容 | 基 屹 提 供 |
1 | 新鲜的且尽量多的材料；已知的全长基因序列；尽可能详细的背景资料：DNA/ RNA来源、丰度等。 | DNA/RNA提取，根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针。 | |
2 | 纯化好的DNA/RNA（大于5 ug/样品）；已知的全长基因序列；尽可能详细的背景资料：DNA/ RNA来源、丰度等。 | 根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针。 | |
3 | 以DNA为模板，对目的基因进行荧光定量PCR检测分析 | 提供完整的定量分析结果、实验荧光定量扩增曲线及详细的实验步骤。 |
注意：客户可根据所能提供的起始材料不同，选择从步骤1或2启动项目。
