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10606ES TRIeasy总RNA提取试剂
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- 10606ES
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企业简介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白质改造和酶进化技术为驱动，聚焦生命科学产业链上游核心原料，从事分子、蛋白和细胞三大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业，通过打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，成为国内少数同时覆盖三大品类生物试剂、兼备核心技术自主研发能力和规模化生产能力的高新技术企业，产品广泛应用于生命科学研究领域、诊断与检测领域和生物医药领域。
主营业务
公司凭借在蛋白质改造和酶进化领域的技术优势和深耕生物试剂行业多年积累的丰富经验，构建了品质优良、类型齐全、种类丰富的产品管线。自公司成立以来，公司研发、生产和销售的生物试剂超过3000种，涵盖分子、蛋白、细胞三大品类的生物试剂，能够满足客户多种类型生物试剂的一体化采购需求。公司核心产品覆盖qPCR系列、NGS系列、逆转录系列、核酸提取与纯化系列、PCR系列、分子克隆系列、体外转录系列、抗体、蛋白纯化系列、蛋白分析系列、重组蛋白、细胞分析系列、细胞培养系列、细胞转染系列、报告基因检测系列等多个品类的生物试剂，广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。
发展历程
荣誉资质
翌圣生物通过申请商标和软件著作权的方式保障核心技术和市场竞争力，不断加强公司品牌建设。截至2022年3月31日，公司已经获得授权18项（其中发明14项、实用新型1项、外观设计3项）和45项与生物试剂相关的软件著作权，拥有经国家知识产权局商标局核准的注册商标权37项以及4项境外注册商标，是国家高新技术企业和上海市专精特新企业。
创新平台
经过多年的产品研发技术经验的沉淀以及持续的研发创新，翌圣生物积极开展“产学研”合作，与拥有生物催化与酶领域国家重点实验室的湖北大学、拥有教育部工业生物领域重点研究基地的江南大学展开合作，优化生物试剂关键原料的生产和表达工艺。翌圣生物以基因工程技术、生物信息技术、细胞生物学技术、免疫学技术、生化分析技术等生命科学领域的共性生物技术为基础，建立了六大核心技术平台——双向分子酶理性设计与定向进化平台、密度发酵与超洁净纯化平台、分子诊断试剂关键原料研发平台、高通量测序建库试剂创新研发平台、高性能单克隆抗体研发平台和mRNA医药应用研发平台，目前已经自主研发出20项核心技术，打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，覆盖技术研发、产品升级、规模生产和质量控制等生物试剂研发和生产的各关键环节。
工业化生产
翌圣生物拥有按照准GMP 标准建设运营的工业化生产基地，配有吨级发酵线、工业级 AKTA 纯化线和全自动包装线。同时，公司通过了ISO 13485:2016质量管理体系认证，从原料控制、生产管理、质检管控、仓储运输等对生产线进行360度管理监督，保证产品过程的可控制性及可追溯性，竭尽全力为您提供可靠的产品。
客户服务
翌圣生物凭借优质稳定的产品质量、高效及时的响应能力、快速稳定的交付能力和周到完备的售后服务获得了众多科研用户和工业用户的认可，为检测公司、治疗公司、工具类公司和科学研究实验室提供应用于科学研究、体外诊断、基因测序、生物医药等的生物试剂。与中国科学院、清华大学、北京大学、复旦大学、上海交通大学、浙江大学等顶尖科研院所和华大基因、恒瑞医药、药明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工业客户建立了稳定、紧密的合作关系，公司产品被多次使用在Nature、Science、Cell等国际顶级期刊论文发表中。
公司企业文化
帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐
◎ 成为生命科学工具领域全球Top⑩
◎ 具备驱动产业变革的技术创新能力
◎ 拥有一支持续学习型的翌圣铁军
翌圣生物始终秉承“帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐”的使命，专注于技术创新和产品升级，不断拓展核心技术的应用领域，为客户提供更为的产品与服务，助力我国打造自主可控的生物试剂产业链。同时，翌圣生物将进一步推进国际化战略，继续布局和拓展海外市场，为全球生物试剂产业发展贡献力量。
详细信息
TRIeasy总RNA提取试剂(TRIeasy Total RNA Extraction Reagent)
TRIeasyTM Total RNA Extraction Reagent是一种适用于各种动植物、细菌组织、细胞的总RNA抽提试剂，具有*的裂解能力，可在短时间内裂解细胞和组织样本，并有效抑制样本中RNA的降解，保持RNA的完整性。样品在该试剂中能够充分裂解，之后加入氯仿离心分层，形成上清层、中间层和有机层(鲜红色下层)，RNA分布在上层水相中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可得到总RNA。提取的总RNA纯度高，基本不含蛋白质及基因组DNA，可直接用于Northern、点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-PCR、poly(A)+选择、RNA酶保护分析以及构建cDNA文库等多种分子生物学实验。
此外，样品中的DNA和蛋白也能以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，而在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。
本品操作简单快速，所有操作可在一小时内完成。对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的裂解效果。
运输与保存方法
冰袋运输。4℃避光保存，有效期一年。
注意事项
1. 本产品中含有苯|酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会引起中毒、灼伤及其他身体伤害。使用时应穿戴防护物，如防护|服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
2. 请穿实验服并佩戴一次性手套操作，避免RNase污染。
3. 需自备氯仿、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇 (DEPC处理水配制)、DEPC和DEPC处理水。
4. 样品用Total RNA Extraction Reagent匀浆后，如果不加入氯仿进行下游实验，可先-70℃冻存，可保存一个月以上。
5. RNA沉淀在75%乙醇中，4℃可保存1周，-20℃可保存1年。
6. RNA半衰期比较短，易降解，建议抽提后尽快进行后续实验。
参考用量
表1 每毫升Total RNA Extraction Reagent能够充分裂解的最大样本量
样本类型 | 样本使用量 |
贴壁细胞 | 10 cm2培养面积 |
悬浮动植物细胞或酵母细胞 | 5×106-1×107个 |
细菌 | 107个 |
动物组织 | 50-100 mg |
植物组织(多糖和多酚含量不高的) | 50-100 mg |
注：过多的样本量可能会导致裂解不充分，并使产物纯度降低。
操作流程
1. 样品的处理
1) 样品匀浆
A. 贴壁细胞
弃去培养液，直接往直径3.5 cm的培养板中加入1 mL Total RNA Extraction Reagent，覆盖并反复吹打裂解细胞。
注：1. 依据培养板的面积而不是细胞的数量来决定Total RNA Extraction Reagent的所需量（每10 cm2 加1 mL）。
2. 加入Total RNA Extraction Reagent量不足时，会导致DNA污染。
3. 贴壁细胞往往不能*从培养瓶（皿）脱落，这并不意味着裂解不*。此时，细胞膜实际已*裂开，并释放RNA，继续后续实验即可。
B. 悬浮细胞
离心收集细胞沉淀，每5×106-1×107个细胞加入1 mL Total RNA Extraction Reagent，用移液器反复吹打。
注：加入Total RNA Extraction Reagent前应避免洗涤细胞，否则会增加mRNA降解的可能性。裂解某些酵母和细菌可能需要使用匀浆器。
C. 动、植物组织
取-70℃冻存动物组织在液氮中充分研磨，按照表1加入适当量Total RNA Extraction Reagent混匀。或取新鲜动植物组织尽量剪碎，加入适当量Total RNA Extraction Reagent，匀浆仪进行匀浆处理。
注：样品体积不要超过加入Total RNA Extraction Reagent体积的10%。
2) 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体*解离。
3) （可选）4℃，12000 g 离心10 min，取上清。
注：离心可去除样品中较多蛋白质、脂肪、多糖或肌肉，植物的块茎结节等。离心后的沉淀中包含有细胞外膜、多糖以及高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂应尽量去除，取澄清的匀浆液进行后续实验。
2 总RNA提取
1) 向上述裂解液中加入1/5体积氯仿（如每1 mL Total RNA Extraction Reagent加入0.2 mL氯仿）。盖紧离心管盖，剧烈震荡15 sec，室温静置2-3 min。
2) 4℃，12000 g 离心10-15 min。
注：1. 离心后混合物可分3层：上层无色水样层，中间层，下层红色有机苯|酚氯仿层。RNA存在于水样层中。
2. 上层容量约为所加Total RNA Extraction Reagent总量的50-60%。如加入1 mL Total RNA Extraction Reagent，上层水相约为500-600 μL。建议吸取400-500 μL，以防吸到中间层造成DNA污染。
3. 有机相和中间层是蛋白和DNA，可用于后续抽提。
3) 小心吸取上层水相至新离心管中，加入1/2体积异丙醇（如每1 mL Total RNA Extraction Reagent加入0.5 mL 异丙醇）。颠倒混匀后室温放置10 min。
4) 4℃，12000 g 离心10 min。
注：RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
5) 小心弃去上清，加入等体积 75%乙醇（DEPC水配制，如每1 mL Total RNA Extraction Reagent加入1 mL 75%乙醇）。涡旋充分洗涤，并轻弹管底，让沉淀悬浮起来。
6) 4℃，7500 g 离心5 min，弃上清，注意不要丢失RNA沉淀。
注：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸到沉淀。
7) 室温放置空气干燥5-10 min。加入30-100 μL 无RNase水溶解RNA，待*溶解后，取少量检测，其余溶液-70℃保存。
注：RNA沉淀不能*干燥，过分干燥会导致RNA溶解度降低。
3 产物检测
A. RNA完整性检测
1) 取1 μL RNA加入适当RNA loading buffer，混匀。
2) 进行电泳检测。若出现清晰的三条带，证明RNA完整性较好。
B. RNA纯度检测
检测260 nm，280 nm OD值，并计算A260/A280比值。纯的RNA的比值应在2.0左右。
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