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40802ES03 脂质体核酸转染试剂 Transfection Reagent
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- 40802ES03
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企业简介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白质改造和酶进化技术为驱动，聚焦生命科学产业链上游核心原料，从事分子、蛋白和细胞三大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业，通过打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，成为国内少数同时覆盖三大品类生物试剂、兼备核心技术自主研发能力和规模化生产能力的高新技术企业，产品广泛应用于生命科学研究领域、诊断与检测领域和生物医药领域。
主营业务
公司凭借在蛋白质改造和酶进化领域的技术优势和深耕生物试剂行业多年积累的丰富经验，构建了品质优良、类型齐全、种类丰富的产品管线。自公司成立以来，公司研发、生产和销售的生物试剂超过3000种，涵盖分子、蛋白、细胞三大品类的生物试剂，能够满足客户多种类型生物试剂的一体化采购需求。公司核心产品覆盖qPCR系列、NGS系列、逆转录系列、核酸提取与纯化系列、PCR系列、分子克隆系列、体外转录系列、抗体、蛋白纯化系列、蛋白分析系列、重组蛋白、细胞分析系列、细胞培养系列、细胞转染系列、报告基因检测系列等多个品类的生物试剂，广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。
发展历程
荣誉资质
翌圣生物通过申请商标和软件著作权的方式保障核心技术和市场竞争力，不断加强公司品牌建设。截至2022年3月31日，公司已经获得授权18项（其中发明14项、实用新型1项、外观设计3项）和45项与生物试剂相关的软件著作权，拥有经国家知识产权局商标局核准的注册商标权37项以及4项境外注册商标，是国家高新技术企业和上海市专精特新企业。
创新平台
经过多年的产品研发技术经验的沉淀以及持续的研发创新，翌圣生物积极开展“产学研”合作，与拥有生物催化与酶领域国家重点实验室的湖北大学、拥有教育部工业生物领域重点研究基地的江南大学展开合作，优化生物试剂关键原料的生产和表达工艺。翌圣生物以基因工程技术、生物信息技术、细胞生物学技术、免疫学技术、生化分析技术等生命科学领域的共性生物技术为基础，建立了六大核心技术平台——双向分子酶理性设计与定向进化平台、密度发酵与超洁净纯化平台、分子诊断试剂关键原料研发平台、高通量测序建库试剂创新研发平台、高性能单克隆抗体研发平台和mRNA医药应用研发平台，目前已经自主研发出20项核心技术，打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、细胞的技术开发路径，覆盖技术研发、产品升级、规模生产和质量控制等生物试剂研发和生产的各关键环节。
工业化生产
翌圣生物拥有按照准GMP 标准建设运营的工业化生产基地，配有吨级发酵线、工业级 AKTA 纯化线和全自动包装线。同时，公司通过了ISO 13485:2016质量管理体系认证，从原料控制、生产管理、质检管控、仓储运输等对生产线进行360度管理监督，保证产品过程的可控制性及可追溯性，竭尽全力为您提供可靠的产品。
客户服务
翌圣生物凭借优质稳定的产品质量、高效及时的响应能力、快速稳定的交付能力和周到完备的售后服务获得了众多科研用户和工业用户的认可，为检测公司、治疗公司、工具类公司和科学研究实验室提供应用于科学研究、体外诊断、基因测序、生物医药等的生物试剂。与中国科学院、清华大学、北京大学、复旦大学、上海交通大学、浙江大学等顶尖科研院所和华大基因、恒瑞医药、药明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工业客户建立了稳定、紧密的合作关系，公司产品被多次使用在Nature、Science、Cell等国际顶级期刊论文发表中。
公司企业文化
帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐
◎ 成为生命科学工具领域全球Top⑩
◎ 具备驱动产业变革的技术创新能力
◎ 拥有一支持续学习型的翌圣铁军
翌圣生物始终秉承“帮助客户创造价值，让世界更健康更快乐”的使命，专注于技术创新和产品升级，不断拓展核心技术的应用领域，为客户提供更为的产品与服务，助力我国打造自主可控的生物试剂产业链。同时，翌圣生物将进一步推进国际化战略，继续布局和拓展海外市场，为全球生物试剂产业发展贡献力量。
详细信息
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent
脂质体核酸转染试剂
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） | *（元） |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂 | 40802ES02 | 0.5ml | 4℃ | 738.00 | 488.00 |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂 | 40802ES03 | 1 ml | 4℃ | 1308.00 | 868.00 |
Hieff TransTM Liposomal Transfection Reagent 脂质体核酸转染试剂 | 40802ES08 | 5×1ml | 4℃ | 4878.00 | 3248.00 |
产品描述
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其*的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸-Hieff TransTM复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。
Hieff TransTM以无菌的液体形式提供。通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl左右，则1ml Hieff TransTM约可做660 次转染；对于6孔板，每次用6μl左右，则1ml Hieff TransTM约可做160 次转染；
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品4ºC保存，一年有效。不可冷冻！
注意事项
1）Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。
2）Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。
4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。
5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到zui大的转染效率。DNA 和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，比如24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.5 µg DNA和1-1.5 µl 转染试剂。通过调整DNA/Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率，保证细胞密度大于90%，DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值在1：0.5-1：5。
操作流程（以24孔板为例，其他培养板加样体积请参考表一）
【注】：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化*使用量。
贴壁细胞：转染前一天（20-24小时），胰|酶消化细胞并计数，细胞铺板（不含抗生素），使其在转染时密度为90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate）。
悬浮细胞：转染当天，配制DNA复合物之前，24孔板中细胞铺板，每500µl生长培养基（不含抗生素）中加入4-8 × 105 cells。
1. 按照以下体系配制DNA-Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂复合物：
1）对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.5μg DNA。混匀。
2）对于每孔细胞，使用50μl无血清培养基（如OPTI-MEMⅠ培养基）稀释0.6-2.5 μl Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂。
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂稀释后室温孵育5min（在30min内同稀释的DNA 混合，保温时间过长会降低活性）。
【注意】：即使脂质体核酸转染试剂使用OPTI-MEMⅠ稀释，细胞也可以使用DMEM 培养。如果DMEM 作为脂质体核酸转染试剂的稀释液，必须在5min内同稀释的DNA混合。
2. 混合稀释的DNA和稀释的脂质体核酸转染试剂（总体积100µl），轻轻混匀，并在室温（15-25℃）孵育20min，使得DNA-脂质体复合物形成。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
【注意】：DNA-脂质体复合物室温至少稳定保存5h。
3. 直接将100µl DNA-Hieff TransTM复合物加入到细胞培养板每个孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
【注意】：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为500µl无血清培养基。
4. 37℃，5% CO2培养箱培养24-48h，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。然而，可能有必要在4-6h后更换生长培养基，不会降低转染活性。
稳转细胞株：转染24h后，按照1：10或更高比例在细胞中加入新鲜生长培养基，转染48h后加入筛选培养基。
悬浮细胞株：在细胞中加入DNA-Hieff TransTM复合物后，如果需要可以4h后加入PMA和/或PHA。对于Jurkat细胞，PHA和PMA的终浓度分别为1µg/ml和50ng/ml，可以提高CMV启动子活性和基因表达。对于K562细胞，只加入PMA足以提高启动子活性。
转染体系的调整
对于不同的细胞培养板，Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂、DNA、细胞和培养基的使用量会有所不同，具体请参考下表（表一）。对于96 孔板培养，不需要提前一天进行细胞铺板，可以直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，这样进一步减少了转染时间。这种改进步骤已经过293-H，293-F，COS-7L和CHO细胞的试验，同传统方法相比活性稍低。快捷的步骤和蛋白表达细胞系的高效转染使得脂质体核酸转染试剂非常适用于96 孔板的高通量转染，比如cDNA文库的筛选和蛋白瞬时表达。
表一 在不同的培养容器中转染，脂质体核酸转染试剂，核酸，细胞和培养基的用量
Culture vessel | Surf. area per well1 | Shared reagents | DNA transfection | RNAi transfection | |||
Vol. of plating medium | Vol. of dilution medium2 | DNA | 脂质体核酸转染试剂 | RNA | 脂质体核酸转染试剂 | ||
96-well | 0.3 cm2 | 100 μl | 2×25 μl | 0.1 μg | 0.2-0.5 μl | 5 pmol | 0.25 μl |
24-well | 2 cm2 | 500 μl | 2×50 μl | 0.5 μg | 0.6-2.5 μl | 20 pmol | 1.0 μl |
12-well | 4 cm2 | 1 ml | 2×100 μl | 1 μg | 2-4.5 μl | 40 pmol | 2.0 μl |
6-well | 10 cm2 | 2 ml | 2×250 μl | 2-4 μg | 5-10 μl | 100 pmol | 5 μl |
60-mm | 20 cm2 | 5 ml | 2×0.5 ml | 4-8 μg | 10-20 μl | 200 pmol | 10 μl |
10-cm | 60 cm2 | 15 ml | 2×1.5 ml | 12-24μg | 30-60 μl | 600 pmol | 30 μl |
1 不同厂商提供的细胞培养板表面积可能有所不同；
2 稀释DNA或RNAi所用的培养基体积。
【注】：该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。使用时DNA（μg）: Hieff TransTM（μl）比值保持在1:0.5-1:5。
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