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BC5965-100T/96S 6-磷酸葡萄糖（P6G）含量检测试剂盒 微量法
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- BC5965-100T/96S
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北京索莱宝科技有限公司
（Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd. ）是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。
总部位于北京，并在设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念，拥有专业的研发和质量检测团队以及的仓储和物流系统。“Solarbio”已经得到科研工作者的认可，成为广大经销商推崇的。
公司拥有一批专业的研发人员，我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广，品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时，索莱宝公司提供各种常规生化试剂，库存常备产品多达10000多种，可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面，索莱宝谨记公司信念：质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程，科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序，我们恪守对每一位用户的承诺：用专业的态度做专业的品牌。同时，公司组建了一支专业的技术服务队伍，能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买索莱宝产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
索莱宝公司坚持与接轨，注重和企业的合作与交流，并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多合作，不断为广大生物科研工作者提供更优质的产品和服务。公司理念：“为科研服务，为生命尽责”。一个人能够走多远，取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作。
索莱宝诚招生物试剂研发人员，期待与广大同行精诚合作，为广大科研工作者提供优质的产品，高效的物流以及专业的售后服务。索莱宝感谢所有朋友的支持与帮助，您的支持是我们前进的动力和保障。让我们携手同行，共同创造美好的明天。
详细信息
动物组织6-磷酸葡萄糖（G6P）含量检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC5965
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体110mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一A | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
试剂一B | 液体25mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
试剂三 | -20℃保存 | |
标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前将试剂一A全部溶于试剂一B，充分溶解后使用，未用完的试剂2-8℃保存4周（试剂颜色由透明变至淡黄色为正常现象，可正常使用），禁止放-20℃保存。
2、 试剂二：临用前加入0.5mL蒸馏水充分溶解，未用完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。
3、 试剂三：临用前加入1mL蒸馏水充分溶解，未用完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融（该试剂为冻干试剂，可能存在肉眼观察不同瓶内试剂量相差较大甚至量很少的现象，此现象不影响使用，实际质量相同）。
4、 试剂三工作液：临用前根据样本量按试剂三：蒸馏水=3μL：12μL（共15μL，约4T）的比例配制后使用，现配现用。
5、 标准品：临用前加入1.645mL蒸馏水充分溶解成20μmol/mL 6-磷酸葡萄糖标准品，2-8℃保存4周。
6、 0.5μmol/mL标准品配制：取25μL 20μmol/mL 6-磷酸葡萄糖标准品，加975μL蒸馏水充分溶解成0.5μmol/mL 标准品进行测定，现配现用。
7、 工作液：临用前根据样本量按试剂一：试剂二：试剂三工作液=870μL：15μL：15μL（共900μL，约4T）配成工作液后使用，现配现用。
产品说明：
6-磷酸葡萄糖（Glucose-6-Phosphate，G6P），又称葡萄糖-6-磷酸，是糖酵解和磷酸戊糖途径的中间产物，广泛存在于动植物体和微生物中。在糖酵解的第一步反应中，葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸，然后通过磷酸葡萄糖异构酶的催化形成果糖-6-磷酸，以继续糖酵解的其它步骤；而在戊糖磷酸途径中，葡萄糖-6-磷酸是其第一个底物，该过程也是生成NADPH的主要途径。此外，葡萄糖-6-磷酸也能转化形成糖原或淀粉而被储存起来。
6-磷酸葡萄糖脱氢酶可催化G-6-P和NADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH，在340nm处有吸收峰，据此可以计算6-磷酸葡萄糖的含量。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、天平、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、 样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于沸水浴煮5min（用封口膜封口，防止爆盖），冷却至室温后于4℃ 12000g离心10min，取上清置冰上待测。
二、测定步骤
1、 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，分光光度计用蒸馏水调零。
2、 工作液37℃预热5min。
3、 样本测定（在96孔UV板/微量石英比色皿中加入下列试剂）
试剂名称（μL） | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 75 | - | - |
标准品 | - | 75 | - |
蒸馏水 | - | - | 75 |
工作液 | 225 | 225 | 225 |
充分混匀，立即测定340nm下10s时的吸光度A1，然后迅速置于37℃反应10min，测定10min10s时的吸光度A2，分别记为A1测定、A2测定、A1标准、A2标准、A1空白、A2空白。计算ΔA标准=（A2标准-A1标准）-（A2空白-A1空白），ΔA测定=（A2测定-A1测定）-（A2空白-A1空白）。标准管和空白管只需测1-2次。 | |||
三、6-磷酸葡萄糖含量计算公式
1. 按样本蛋白浓度计算：
G6P含量（μmol/g prot）=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷（Cpr×V提取）×F
=0.5×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr×F
2. 按样本质量计算：
G6P含量（μmol/g 质量）=ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷W×F
=0.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F
C标准：标准点浓度，0.5μmol/mL；V提取：加入提取液的体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；F：稀释倍数。
注意事项：
1. 最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
2. 若样本ΔA<0.01，可适当增大样本量后测定；若样本ΔA>1.0或A测定>1.5，可用蒸馏水稀释上清液后测定，
注意同步修改计算公式中的稀释倍数。
实验实例：
1、 取0.102g大鼠肝脏加入提取液进行冰浴匀浆，取上清后按照测定步骤操作，用96孔UV板测得ΔA测定=（A2测定-A1测定）-（A2空白-A1空白）=（0.281-0.177）-（0.045-0.045）=0.104，ΔA标准=（A2标准-A1标准）-（A2空白-A1空白）=（0.470-0.074）-（0.045-0.045）=0.396，按样本质量计算6-磷酸葡萄糖含量得：
G6P含量（μmol/g 质量）=0.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F =1.287 μmol/g 质量。
2、 取0.103g大鼠肺加入提取液进行冰浴匀浆，取上清后按照测定步骤操作，用96孔UV板测得ΔA测定=（A2测定-A1测定）-（A2空白-A1空白）=（0.179-0.113）-（0.045-0.045）=0.066，ΔA标准=（A2标准-A1标准）-（A2空白-A1空白）=（0.470-0.074）-（0.045-0.045）=0.396，按样本质量计算6-磷酸葡萄糖含量得：
G6P含量（μmol/g 质量）=0.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W×F =0.809 μmol/g 质量。
参考文献：
[1] Belford J, Feinleib M R .The increase in glucose-6-phosphate content of the heart after the administration of inotropic catecholamines, calcium, and aminophylline[J].Biochemical Pharmacology, 1962, 11(11):987-994.
[2] Ashcroft S , Capito K , Hedeskov C .Time course studies of glucose-induced changes in glucose-6-phosphate and fructose-1, 6-diphosphate content of mouse and rat pancreatic islets[J].Diabetologia, 1973, 9(4):299-302.
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