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牛腺病毒3型（BAV-3）试剂盒（荧光-PCR法）
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详细信息
牛腺病毒3型(BAV-3)试剂盒(荧光-PCR法)
【产品名称】
通用名称：牛腺病毒 3 型（BAV-3）核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）
Name：Bovine Adenovirus Detection Kit（Real-Time PCR Method）
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
牛腺病毒 3 型（BAV-3）是引起牛呼吸道疾病的主要病原体之一，特别是新生犊牛。临床症状包括发烧，呼吸困难，鼻腔和眼结膜有分泌物等。病理变化主要出现在肺部，具有鲜明的肺小叶、肺气肿和突变。血清学调查表明该病广泛分布于世界各地，给养牛业造成巨大经济损失。
本试剂盒适用于检测肺组织、呼吸道及眼鼻分泌物等样本中的牛腺病毒 3 型，用于牛腺病毒 3 型感染的辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术，设计一对牛腺病毒 3 型基因保守区特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光 PCR 技术对牛腺病毒 3 型基因保守区的 DNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
包装规格 | 50T/盒 |
BAV-3 反应液 | 500μL×2 管 |
酶液 | 50μL×1 管 |
BAV-3 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
捕杀牛：取肺部病变组织，5g；活牛：用灭菌棉拭子沾取牛气管或眼鼻分泌物，然后置于装有 0.5mL 生理盐水的离心管中。
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输， 严禁反复冻融。
1. 样品处理（样本处理区）
取动物组织及其制品、食品或饲料约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中， 8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。核酸提取
1.3 核酸提取采用核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 10份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
1. 结果分析判定
1.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
1.2 结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线；
可疑：检测通道 35<Ct 值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38，且曲线有明显的增长曲线， 判定为阳性，否则为阴性；
阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
2. 质控标准
阴性质控品：Ct>38 或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
牛腺病毒3型(BAV-3)试剂盒(荧光-PCR法)【注意事项】
Ø 所有操作严格按照说明书进行；检验过程中，参照《GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测》的规定进行。
Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；
Ø 反应液应避光保存；
Ø 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区工作服；
Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全 通则》进行处理。
沪峥PCR优势：
1. 特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保
所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测。
2. 重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证。
3. 灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
