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鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测试剂盒
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生产厂家山东蓝都生物科技有限公司成立于2015年,秉承“品质至上、客户第一、追求ZHUOYUE”的生产服务宗旨,“自强不息、艰苦奋斗、务实创新、追求ZHUOYUE”的精神,不忘初心,目标坚定,做BEST产品,服务于行业客户。食品安全检测事业部现有保健品类、激素及类固醇类、重金属类、喹恶啉类、消炎镇痛类、水产违禁类、牛羊马类、农药DU品类、禽病类、生理活性物、体外诊断IVD炎症、细菌含传染病类等多个品种。
主要产品有真菌毒素免疫亲和柱、真菌毒素嵌合酶联免疫检测试剂盒、真菌毒素胶体金定性检测卡、量子点定量检测卡、食品安全定量/定性检测箱、食品安全抗原及单克隆抗体、单克隆及多克隆抗体制备试剂耗材及相关仪器、食品安全与动物疫病类抗原及单克隆抗体等约1200种,部分产品已经出口到德国、俄罗斯、伊朗、英国、美国等多个国家。
地址:山东省滨州市国家经济技术开发区黄河二路376号
邮编:256600
鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测试剂盒说明书
【用途】用于鸡传染性支气管炎病毒核酸的检测。
【规格】50T/盒
【试剂】
编号 | 数量(50T) | 保存 | |
SR-I | 10mL | 室温 | A盒 |
SR-II | 25mL | 室温 | |
SR-Ⅲ | 36mL | 室温 | |
SR-Ⅳ | 18mL | 室温 | |
TU-1 | 3.75mL | 室温 | |
TU-2 | 2.5mL | 室温 | |
RT-PCR反应液 | 500uL | -20℃ | B盒 |
酶混合液 | 50uL | -20℃ | |
引物混合液 | 100uL | -20℃ | |
阳性对照 | 30uL | -20℃ | |
阴性对照 | 100uL | -20℃ | |
ddH2O | 1mL | -20℃ | |
6xDNA Loading buffer | 100uL | -20℃ | |
Marker DL2000 | 50uL | -20℃ |
【操作步骤】
1.鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测试剂盒核酸提取
(1) 取疑似病料(气管及分泌物、肾脏、肺脏等病毒靶组织),用PBS研磨成1:3悬液,在-20℃冻融1次,经12000 r/min离心3 min,上清液-20 ℃保存备用。
(2)取200uL上清液,移入1.5mL灭菌EP管中,加入200uLSR-I,漩涡振荡混合均匀,静置5min。
(3)加75uL TU-1,漩涡振荡混合均匀,12000r/min离心5 min。
(4)将上清转移到新的2 ml离心管(试剂盒内提供)中,加入300 uL SR-Ⅳ,上下倒置6-8次,混合均匀。
(5)将步骤4中的混合液移入制备管中(试剂盒内提供),并将制备管置于同一2 ml离心管,8000 r/min离心1min。
(6)弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,加500 uL SR-II,室温静置1min,12000 r/min离心1 min。
(7)弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,加700 uL SR-Ⅲ,12000 r/min离心1 min。
(8)将制备管置回到2 ml离心管中,12000 r/min离心2min。
(9) 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管中(试剂盒内提供),在制备管膜中央加40 uL TU-2, 室温静置1 min。12000 r/min离心1 min洗脱。洗脱液即为模板,即用或-20℃冻存备用。
2.One-Step RT- PCR加样体系(20uL体系)
RT-PCR反应液 | 10uL |
引物混合液 | 2uL |
酶混合液 | 0.8uL |
ddH2O 模板 | 5.2uL 2uL |
3.反应程序
第1步 | 50℃ | 45min | |
第2步 第3步 | 94℃预变性 94℃变性 | 5min 45 s | |
第4步 | 52℃退火 | 45 s | 34个循环(3~5步) |
第5步 | 72℃延伸 | 45 s | |
第6步 | 72℃延伸 | 6min | |
第7步 | 4℃终止 | 5min |
4.电泳
配制1.0%琼脂糖凝胶,取PCR产物5uL,混合1uL6xDNA Loading buffer,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加5uL DL2000 DNA Marker,在120-150v 电压下,1×TAE液中电泳15-20min,在紫外成像仪下观察结果。
【结果判定】
在约490bp左右位置出现扩增带,表明鸡传染性支气管炎病毒核酸检测阳性;
若在490bp处没有条带出现则样品判为阴性。
1.标准阳性片段M.DL2000 Marker
【注意事项】
1. 阳性对照极易污染试验环境,如果做阳性对照,吸取阳性对照枪头妥善处理
2. -20℃保存的试剂在使用前应*融化,振荡混匀后 8000rpm 离心 15 秒使液体全部沉于管底,置冰盒中取用。严禁使用超过有效期限的试剂;严禁混用不同试剂盒组分。
3. PCR 实验室应按功能分为配液区、样品处理区、扩增区、电泳区。物流方向依次为配液区 →样品处理区→扩增区→电泳区。所有接触病料的物品、器具,尤其是阳性对照及PCR 产物和使用后的电泳缓冲液均应合理处置,以免污染实验室。
4. 严格按照国标和说明书要求操作。吸取液体时移液器吸头尽量在液体上层吸取,移液精确;吸取不同液体时必须更换移液器滴头,防止试剂组分污染以及样品污染。
5.试剂盒组分在生产分装时考虑到液体的损耗,实际装量略多于标注装量,因此严禁直接在 原包装中配制反应体系,以免造成反应体系各组分比例不准确。
【保存期】本制品有效期为1年。
仅供兽医诊断使用
长期提供原核、真核蛋白表达构建服务
长期 提供抗原偶联、 HRP、生物素、糖基化、亲和素、FITC等偶联标记多肽、抗体、抗原、蛋白等服务