非标定量（Label-free）实验

非标定量(Label-free)

非标定量(Label-fiee) :是一种非标记的差异蛋白质组学技术,不需要使用同位素标记物标记肽段，直接根据质谱峰的信号强度来对肽段或蛋白进行相对定量。Label-free通过HPLC分级液质联用对酶解肽段进行分析. 现在基于质谱的非标定量技术主要有两种: 一是根据一级质谱相关的肽段峰强度以及峰面积等信息进行蛋白定量，二是根据蛋白对应肽段的二级质谱总数(spectral counts)进行定量。

实验步骤

1.蛋白前期处理，包括去除核酸，蛋白纯化定量，SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳;

2.蛋白质胶内酶切;

3.多肽纯化; .

4.多肽混合物的质谱分析，包括质谱鉴定和定量信息比较;

5.生信分析

结果展示

实验周期及交付标准

1.实验周期: 4-6周

2.交付标准:蛋白定量结果、鉴定结果、质谱原始数据、生信分析结果(G0分析. KEGG分析等等)

需确认的信息

1.样本的种属

2.样本的类型(组织or细胞or血液)

3.样本的数量及分组

4.分析要求

参考文献

[1]HuS, Qiu N, Liu Y , et al. Identification and comparative proteomic study of quail and duck egg white protein using 2-dimensional gel electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight tandem mass spectrometryanalysis[J]. Poultry Science, 2016:pew033.

[2] Bouvet M , Turkieh A，Acosta-Martin A E , et al. Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis[J]. Journal

of Visualized Experiments, 2014(93).